转基因植物的鉴定 第四组.pptVIP

第二页 生物技术101班第四小组： 叶春蕾 常杰 马娟 赵曼 韩亚丽 韩利燕 四步搞定转基因植物的检测 第二步 外源基因PCR扩增 对第一步提取出来的基因组DNA进行PCR扩增。目的:获得大量的外源基因。 1.预变性(94度，3- 10min) 2.变性(94度，30-60s) 3.退火(37-55度，1-2min) 4.延伸(72度，30-60s) 5.最终延伸(5-20min) 循环次数：25-35次 第三步琼脂糖凝胶电泳 第四步 Southern杂交分析 1.将胶上的DNA变性 2.在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上 3.经干烤或紫外线照射固定 4.与相应的标记探针进行杂交 5.用放射自显影显色，得出实验结果。 * * * 第一步 转基因植物基因组DNA的提取 植物细胞通过液氮研磨而被破碎，通过细胞提取液中的去垢剂溶解蛋白而破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。通过酚-氯仿的方法去除蛋白，RNA通过RNase去除，最后DNA经乙醇沉淀。 可以用CTAB法或SDS法。 外源基因PCR扩增完毕后，将其产物进行琼脂糖凝胶电泳。 目的：纯化浓缩待检基因。将待检基因与基因组的其他基因分离开来，为下一步Southern杂交分析做准备。 Thanks for your attention