《薄层层析法》.pdfVIP

薄层层析法 鉴别中药黄柏 （设计型实验） 实验目的 实验目的 实验学生自行设计实验，完成薄层层析法对 市售中药黄柏药材真伪的鉴别,包括实验原理、 实验步骤、展开剂的溶剂系统的选择、溶剂配 比、鉴别方式、结果讨论。通过实验了解薄层 层析分离和鉴定有机物的原理和方法，掌握薄 层层析分离和鉴定有机物的操作步骤。 实验原理 薄层色谱是把吸附剂或支持物（如氧化铝、硅 胶和纤维素粉等）均匀地铺在一块玻璃板上形成 薄层，将分离样品滴加在薄层的一端，当流动相 沿着含有固定相的支持物上移动时，被分离组分 就在固定相与流动相之间进行分配或吸附，经过 反复无数次的分配平衡或吸附平衡，最后按照各 个组分的差异而被分离。 试剂材料 • 层析缸、玻璃研钵、层析玻璃板（5 ×20cm ）、 微晶纤维素粉、毛细管 • 正丁醇、冰醋酸、二氯甲烷、氯仿、甲醇、氨水 • 碘缸 实验安排 实验安排 一、教师讲解 薄层层析的原理 常规样品前处理方法 薄层层析操作方法、操作注意事项 提出本次实验目的，要求； 实验安排 实验安排 二、学生任务 1、学生设计、准备实验，完成整个实验过程设计，提 出详细实验方案、所需试剂和耗材； 2、学生实验方案经教师审查合格后可进行实验； 3、学生完成实验报告，最终鉴定结果。其中详细讨论 实验设计的原理、思路、实验现象的分析，疑难问 题的讨论。 薄层层析常规操作方法 1、薄层板制备 一般将1份吸附剂与3份粘合剂在研钵中向一个 方向研磨混和均匀，去除表面气泡后，倒到干净 的玻璃板上，将玻璃板置水平桌面上多次颠振直 至玻板上的薄层表面均匀、平整、无麻点、无气 泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后 立即使用或置干燥器中备用，或用商品预制板。 薄层层析常规操作方法 2、点样： 用毛细管点样于薄层板上，一般为圆点， 点样基线距底边1.0~1.5cm，样品点直径一般不 大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影 响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面 。 薄层层析常规操作方法 3、展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂 中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜， 密闭，待展开至规定距离，除另有规定外， 一般为8～15cm，取出薄层板，晾干。 结果分析 4.显色 将除去展开剂的层析板碘缸，显色20～30min， 即出现褐色斑点，取出后分别计算Rf值，并比较 Rf值，判断未知试样中存在的物质。