常规监测项目及方法.ppt

生物监测的特点 综合性 连续性 累积性 灵敏性 经济性 在线式发光菌毒性分析仪 发光细菌发光的强弱标志着其生命力的强弱 通过检测细菌发光强度来确定被测水样的毒性 生物监测的主要方法 生物测试法 生物群落监测方法 细菌学检验法 生物测试法 利用生物受到污染物质危害或毒害后所产生的反应或生理机能的变化，来评价水体污染状况，确定毒物安全浓度的方法称为生物测试法。 急性毒性试验 试验方法 试验生物选择、收集和驯养 试验条件 试验溶液 试验步骤 质量保证与质量控制 取放试验生物注意事项 随机 尽量减少人为胁迫 取放中受伤的要弃除 同一试验，动物应在30min内分组完毕 生物学指标层次 细胞、亚细胞、生化反应水平（如酶活性，染色体异常、金属硫蛋白等） 个体水平（呼吸、摄食、排泄、生长、生殖力、游泳能力等） 种群水平（种群生物量、生产力、年龄组成、性比、出生率、死亡率等） 群落水平（种的丰度、分布、多样性、营养关系等） 生态系统水平（如能流、系统结构等） 微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1／20－1／5，即微核（micronucleus）。 微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。 微核实验常用生物： 紫露草(Tardescantia paludosa)又称沼泽紫露草 多年生草本 开蓝紫色花 试验步骤 幼期花序（10个以上花蕾）；随机采集花枝；带两片叶子，6－8cm长的茎； 500ml烧杯，倒入试验液，蒙上带孔的薄膜或板，插入花枝，每组插15枝。 海水可用自来水稀释50％后再处理。 对照组用自来水。 人工光源下处理6h。 恢复培养 植株放在清洁水中24－30h，使达四分体时期。 花粉四分体：指种子植物的花药中，花粉母细胞减数分裂的结果所产生的四个染色体半减的细胞，它发生后不久，暂时停留于花粉母细胞的壁中，接着母细胞壁破裂，各自分裂成四个花粉粒。根据发生减数分裂的轴的相互位置，四分体的排列形成四面体形、等面形。交互对生形、T字形以及线形等。一般在单子叶植物成等面形，在双子叶植物成四面体形 固定及保存 去掉叶片和花梗，把花序放入卡诺氏液中固定15～24h，之后依次移入95％、85％、75％的酒精中各处理10min，最后移入70％酒精中保存。 制片 选取经处理后的较幼嫩的花蕾，打开花蕾取出花药，置于清洁载玻片上，用解剖针将花药壁轻轻压碎，除去残存的花药壁，经醋酸洋红染色后加盖片，在低倍镜下寻找合适的四分体时期。 微核观察 微核圆形或椭圆形，游离于主核外，着色与主核一致，大小约为正常核的1/10。四分体中可出现一个或多个微核。 微核统计和污染判断 统计片中四分体总数及每个四分体中的微核数。每个样本至少计数2000个四分体，将所有四分体中观察到的微核数全部加起来，按下式计算各实验组的微核率： 优点 对诱变剂、辐射等反应敏感； 花粉母细胞在减数分裂过程中高度同步，有大量四分体可供计数； 自然本底微核率低； 时间短； 取材方便； 实例 蚕豆根尖微核监测技术 原理：根尖细胞在有丝分裂中染色体常发生断裂，一般可自行愈合，如果受有害因子攻击则不能愈合甚至增加断裂，形成染色体片段，这些片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞两极，留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核即微核。可根据微核率高低说明诱变物强弱。 实验材料：松滋青皮豆 步骤： 浸种催芽 处理根尖：每一处理选6－8粒根长一致的种子，放入盛有待测液的培养皿中，自来水对照，处理4－6h 根尖细胞恢复培养 根尖细胞的固定 孚尔根（Feulgen）染色 制片：1mm左右，醋酸，捣碎，加盖片，压片 镜检 10‰以下无污染、 10－18 ‰轻污染、 18－30 ‰中污染、 30％以上重污染 鱼血细胞微核试验 取受污染鱼静脉血， 做血涂片， 甲醇固定Giemsa染色， 高倍镜下计数， 每片计数5000个红细胞，以计算微核产生率。 污染物致突变性检测（Ames试验） 1975年建立沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）。 目前已被广泛采用。 方法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应 有关名词： 回复突变（Reverse? Mutation）：细菌在化学突变物作用下由营养缺陷型回变到野生型。 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验：利用一组鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株测定引起沙门氏菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的组氨酸缺陷型（his-）回变到野生型（his+）的试验方法。 his-菌株不能合成组氨酸