《离子交换层析纯化血清蛋白质》.pptVIP

   离子交换层析纯化血清蛋白质   　　　 R-N+(CH3)3Cl- +A-B+ R-N+(CH3)3A-+B+Cl-  季胺基 　　　　R-SO-3 H + + A-B+ R-SO-3 B + + A-H + 磺酸基 一、原理（2）  DEAE纤维素为阴离子交换剂，能吸附带负电荷的物质，在0.02M pH6.5醋酸铵缓冲液条件下，牛血清中的白蛋白、α-球蛋白和β-球蛋白均带负电荷，能被DEAE纤维素吸附。而γ-球蛋白带正电荷不被吸附而直接流出，此时收集的即为提纯的γ-球蛋白。 提高盐浓度至0.06M NH4Ac,α-球蛋白和β-球蛋白可被洗脱下来。然后，再将盐浓度提高到0.3M NH4Ac,则白蛋白被洗脱下来，此时收集的即为较纯的白蛋白。 二、器材与试剂1、器材：层析柱移液管滴管玻璃棒烧杯部分收集器恒流泵试管及试管架 滤纸剪刀及镊子塑料反应板2、试剂：（1）0.3M pH6.5醋酸铵缓冲液（2）0.06M pH6.5醋酸铵缓冲液（3）0.02M pH6.5醋酸铵缓冲液（4）200g/L 磺基水杨酸 三、操作1、装柱：方法同“血清白蛋白盐析及分子筛层析脱盐”，用0.02M NH4Ac平衡柱子。2、加样：取2ml血清轻轻加于柱床上，待血清样品全部进入柱床后，用移液管吸0.02M NH4Ac溶液约4-5ml加于柱床上。3、洗脱：连接衡流泵并以1-1.5ml/min的流速继续用0.02M NH4Ac溶液淋洗，随时监测γ-球蛋白的流出（约5-6ml液体），并接收，留作电泳用。 4、洗脱：收到γ-球蛋白后，继续洗脱30ml，然后提高盐浓度至0.06M NH4Ac, α-球蛋白和β-球蛋白可被洗脱下来，收集5-6ml，检测到蛋白质后继续洗脱30ml。最后，再将盐浓度提高到0.3M NH4Ac,则白蛋白被洗脱下来，随时监测蛋白的流出并接收，留作电泳用。5、结束：收到白蛋白后继续洗脱１０－１５分即可结束。 四、现象及解释：五、结果与讨论： * * 交换剂的基本类型包括： 树脂＼纤维素＼葡聚糖 依据被分离样品带电情况而选择阴阳交换剂。 阴离子交换 阳离子交换 一、原理（1）