《PRB介导子宫内膜癌细胞对MPA敏感性的作用机制研究》.pdf

· 1252 · 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2014Sep；30(9)：1252～6 网络出版时间：2014—8—711：40 网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．09．015．html PRB介导子宫内膜癌细胞对MPA敏感性的作用机制研究 王 晶，孙 笑，王丽华，王玉东 (上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科，上海 200030) doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2014．09．015 前，孕激素长期、大量应用为年轻子宫内膜癌患者保 文献标志码 ：A 文章编号 ：1001—1978(2014)09—1252—05 守治疗及晚期、复发患者的主要方法。孕激素对子 中国图书分类号：R329．25；R345．57；R392．11；R737．33； 宫内膜不典型增生、低级别子宫内膜癌的反应率分 R977．12 别为67％一82％、50％～70％，仍有一部分分化 良 摘要：目的 明确孕激素受体 B(PRB)介导子宫内膜癌细 好的年轻早期患者激素治疗无效，出现复发和转移， 胞对醋酸甲羟孕酮 (MPA)的敏感性，及观察干扰 PRB表 最终采取手术切除子宫。孕激素主要是通过孕激素 达，MPA对内膜癌细胞生物学行为的影响。方法 利用慢病 毒载体系统转染对孕激素敏感 的Ishikawa细胞 ，干扰 PRB 受体B (progesteronereceptorB，PRB)抑制肿瘤 的 表达，实时荧光定量 PCR(qPCR)及Westernblot检测Ish— 生长。本研究在分析 PRB介导内膜癌细胞对孕激 ikawa细胞 PRB的mRNA和蛋 白水平。MTr法、流式细胞技 素敏感性的基础上，进一步探讨 PRB下调后，MPA 术 (FACS)、Transwell法分别检测 MPA对内膜癌细胞增殖、 对 内膜癌细胞生物学行为的影响及相关机制，为正 凋亡及侵袭能力的影响；Westernblot检测MPA对子宫内膜 确选择内膜癌的治疗方法，提高疗效提供理论基础。 癌细胞丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)／细胞外信号调节激 1 材料与方法 酶 (ERK)信号通路的影 响。结果 慢病毒载体介导的 1．1 主要试剂及仪器 人子宫内膜癌细胞系 Ish— RNA干扰 Ishikawa细胞明显抑制了PRB的mRNA和蛋 白表 ikawa购 自美国模式菌种收集中心 (ATCC)。细胞 达水平 (P0．01)；MPA对 Ishikawa细胞具有抑制增殖、侵 袭，并促进凋亡的作用 (P0．01)；干扰PRB表达后，孕激 培养基DMEM—F12、胎牛血清 (FBS)购 自美国Gib- 素作用则相反 ，且激活 MAPK／ERK通路。结论 PRB介导 CO公司。MTr、MPA为Sigma公司产品，DMSO购 自 了子宫内膜癌细胞对 MPA的敏感性 ，干扰 PRB的表达， Amresco公司。MPA 以DMSO溶解为浓度 10mol MPA可通过激活ERK1／2一MAPK通路，影响内膜癌细胞的生 · L。的储存液，充分溶解后分装，一20℃保存，培 物学行为。 养液 中 DMSO 的终浓度不超过 0．1％。兔抗人 ERK、p-ERK多克隆抗体为CST公司产品，TRIzol为 关键词：子宫内膜癌细胞 ；丝裂原活化蛋白激酶；细胞外信号 Invitrogen公司产品，逆转录试剂盒及 PCR试剂盒为 调节激酶；醋酸甲羟孕酮；孕激素受体 B；孕激素耐药