《不同氮浓度下茶树氮合成关键酶基因的表达分析》.pdf

核 农 学 报 2014，28(6)：0985～0989 985 JournalofNuclearAgriculturalSciences 文章编号 ：1000-8551(2014)06~985—05 不同氮浓度下茶树氮合成关键酶基因的表达分析 林郑和 钟秋生 陈常颂 陈志辉 游小妹 (福建省农业科学院茶叶研究所 ，福建 福安 355000) 摘 要：本研究以10月龄扦插九龙袍荼苗[Camelliasinensis(L．)O．Kuntzeev．Jiulongpao]为试验材料 ， 通过沙培试验 ，设4个N浓度 (0、60、600、6000mmol·L )，每周3次，处理后21周，克隆得到茶叶中氮 合成转化关键酶基 因：谷氨酸脱氢酶 (GDH)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酰胺 一酮戊二酸氨基转移酶 (GOGAT)的保守区，在 GenBank登录号分别：JN602371、JN602372、JN602373；进行荧光定量 PCR检测， 发现缺氮下GS、GOGAT基 因的表达增强；GDH基 因表达显著下降。通过回归分析，GS基 因表达与叶片 氮含量呈负相关，而 GDH与叶片氮含量呈正相关。 关键词：缺氮 ；基 因；克隆；荧光定量 PCR DOI：10．11869／j．issn．100—8551．2014．06．0985 氮是植物生长发育需求量最大 的营养元素之一 ， 高 ；而特异表达烟草 GS2基因促进 了转基因烟草幼 既是构成植物有机体的结构物质 ，也是植物生理代谢 苗的生长 ；Man等 人认为 ，转 GS基 因的杨树 ，提 过程中起催化作用的物质 ¨J。在 自然条件下 ，氮的吸 高了氮同化效率和生长。随着氮代谢相关基因研究的 收主要来源于土壤 ，而土壤中的氮通常是有限的，因此 进一步深人 ，将为更加准确 、及时地进行肥料运作提供 土壤缺氮成为世界范围内限制植物生长和发育的重要 科学依据。 因子之一 。 目前关于 GS、GDH等相关报道大多数集中在小 近年来植物氮代谢机理及其调控一直备受关 麦 、水稻㈨ 、烟草 、甜菜 、橡胶树 、甜瓜 注 。氮素对作物的生长发育起着关键作用 ，无机氮 等，而关于茶树 GS、GDH、GOGAT等酶基 因表达的研 只有转化成有机氮的形式才可 以被植物体所利用 ， 究甚少。本研究以福建省农科院茶叶所选育的九龙袍 在高等植物中，谷氨酰胺合成酶 (glutaminesynthetase， (福建省审定品种 ，编号 ：闽审茶 2000002，无性系、灌 GS；E．C．6．3．1．2)和谷氨酸合酶 (Fd—GOGAT，E． 木型、中叶类 、晚生种 ，二倍体)茶树品种为试验材料 ， C．1．4．1．7；NADH．GOGAT；E．C．1．4．1．14)循环是 克隆茶树叶片 GS、GDH、GOGAT酶基 因的保守区，利 无机氮转化成有机氮形式的主要途径 。谷氨酰胺 用实时荧光定量 PCR技术 ，分析其在不 同氮处理浓度 合成酶 (glutaminesynthetase，GS；E．C．6．3．1．2)是将 下的表达差异 ，从分子水平上探讨氮 素含量与 GS、 无机氮转化为有机氮的第一个酶，亦是关键酶 ，催化不 GDH、GOGAT酶基因表达的关系，为氮素吸收、转化 、 同来源的氨与谷氨酸结合形成谷氨酰胺 ；而后谷氨酰 利用提供依据。 胺又在谷氨酸合成酶 (glutamatesynthetase，GOGAT；E． C．1．4．1．14)的催化下，将谷氨酰胺转移到 一酮戊 1 材料与方法 二酸上生成谷氨酸 ，此连续反应过程被称为 “GS- GOGAT循环 ” 。 1．1 试验材料 有研究表明，转 GS基 因小麦并没有提高 GS的总