张嗣良发酵过程氮源利用与培养基研究.pptVIP

* * * * 利用迟效氮源进行头孢菌素C发酵过程中，随着以利用氮源的消耗和糖类机制的耗竭，细胞开始以蛋白类物质分解后的酮酸作为碳源，释放出铵，pH升高，RQ下降，这是明显的氮源利用状态的转变过程。同时，在以玉米粉直接边糖化边发酵的乳酸生产过程中，随着可利用糖类物质的耗竭A点，菌体开始利用玉米粉或初始培养基中残留的氮源物质作为碳源，同样出现CER、pH和RQ代谢参数的相关变化。我们可以利用这些在线参数的变化情况及相互关系，来在线指导工艺条件的和氮源培养基质的优化研究。 * 在红霉素发酵过程中，玉米浆和豆饼粉合理氮源的添加对于维持菌体的代谢活力和产物的合成起着非常关键的作用。 * 氮源流加能明显促进发酵过程菌体的活力，改善菌体的摄氧率，加速产物的合成速率。 * 在以迟效氮源高温豆饼粉和低温豆饼粉为氮源的脱氮假单胞菌发酵维生素B12过程中，在相同的转速和流量情况下，高温豆饼粉培养基的氧传递系数明显高于低温豆饼粉，低温豆饼粉培养基的粘性较大可能是影响氧传递的重要因素。因此合理的氮源的选择在降低设备能耗和氧传递上有着重要意义。 * 在辅酶Q10发酵过程中后期，往往会出现菌体的OUR下降的现象，但溶氧浓度没有变化，经检测得知是由于异常多糖代谢的生成使得培养液中氧传递速率减小，同样的转速和通气条件下，供氧速率降低所致。经分析该异常途径与氮源限制有关，经连续不加速效氮源，使得菌体的氧消耗速率、产物合成速率得以据需增加。 * 氮源的选择，除了关注其作为提供菌体生长所需要的核酸蛋白质的N源意外，还要特别关注氮源中组分对产品纯度和提取方面的影响，从综合分析的角度进行氮源的优化选择。如在乳酸发酵过程中，要考虑氮源所引起的乳酸光学纯度、化学纯度和产率等相参数结合进行氮源的优化调整。 * 在2000年上海国际工业博览会上展出的 FUS-50L(A)发酵罐 软件设计 数据处理 功能 BlORADAR。 在线检测参数 实验室手工测定参数 间接参数(代谢流特征 或工程特征) 适应多种反应器特点 融合多种过程理论和 控制理论 工艺分析与操作 远程通讯与异地数据 传送和分析 生物反应器装备技术进展：首次自主集成开发了用于生物反应器细胞生理代谢特性检测与分析的装备体系，为建立发酵过程宏观现象（发酵表型）与菌体生理特性的微观机制间的关联研究提供软硬件基础 海量数据中寻找过程优化敏感参数 ───发酵过程优化与放大的关键点 质谱仪 多参数发酵罐 解决发酵过程特殊传感器应用和测定技术的困难，实现各种操作参数和生理参数的实时动态检测 ───传感器技术 专业软件包与模型的建立：发酵过程海量数据处理，集工艺研究与数据动态相关分析为一体 ───数据处理与计算机技术 不同尺度参数相关：每个尺度（基因、细胞、反应器）网络通过网络间的输入输出，形成对复杂系统的影响 ───生物学研究 生物过程先进传感技术 (1) 尾气在线质谱技术 (3) 在线显微观察仪 (2) 活细胞量在线测定技术 (4) 原位红外光谱检测技术 (5) 同位素13C的细胞微观代谢检测技术 过程信息处理系统 基于工业以太网技术，多种分析仪器与执行装置的信息无缝对接，不同中间分析实验室或异地工厂的发酵过程数据可同步实时共享 发酵过程优化技术进展：基于微观与宏观相结合的发酵过程代谢流分析，实现菌体细胞微观代谢特性的宏观观测与控制──发酵过程优化的关键问题 1. 按照多尺度关联与调控的要求，采集发酵过程宏观与微观参数，形成状态变量估计，由此研究宏观细胞生理状态、反应器流场状态特征与微观机制（包括生化代谢网络）的关联。 状态变量： 生理状态 反应器流场状态 操作条件 基质、产物 重要的食品添加剂发酵生产取得突破──呈味核苷酸二钠（鸟苷）发酵过程优化 未知代谢物发现 小试与中试规模 ： 17.2g/L →34g/L(60小时) 100m3生产规模效价提高1倍： 16g/L →32g/L(60小时) 打破了日、韩对我国的生产和市场挤压，使濒临停产的投资2.1亿的工厂恢复生产，并在国内外市场竞争中取胜。 鸟苷 细胞代谢途径 代谢流迁移 跨尺度测量 多尺度相关分析与数学模型 验证 酶学与代谢流分析检验 发酵罐数据采集 解除ATP 、 柠檬酸的抑制 AMP Pi 激活作用 NH4+ 丙酮酸代谢 固定CO2 顺乌头酸酶失活： Fe2+ 异柠檬酸失活: Cu2+ 0.3mg/L、Fe2+ 2mg/L和pH 2.0情况下 α-酮戊二酸脱氢酶的调节:高葡萄糖和NH4+阻遏 柠檬酸积累的代谢调节 产品 1.3-二磷酸甘油酸 ADP ATP 3磷酸甘油酸 葡萄糖 甘油醛-3-磷酸 NADH NAD+ PEP