开口箭皂苷成分及抗肿瘤活性.docVIP

开口箭皂苷成分及其抗肿瘤活性( 杨春艳1, 2，晏传奇1，汪植1，3，邹坤1 (1天然产物研究与利用湖北省重点实验室，2三峡大学医学院， 3 三峡大学分子生物学研究所，湖北宜昌 443002) 开口箭（Tupistra chinensis Bak.）系百合科开口箭属植物，开口箭属植物在《拉汉药用植物名称和检索手册》中记载有12种，绝大多数在民间作为习用药使用。开口箭为多年生常绿草本，以其根状茎入药，我国主要分布于中、西部，如陕西、甘肃、湖北、四川、云南、贵州等省，主产于三峡库区及神龙架林区。开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症，土家族用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎，疗效显著。 本文对开口箭抗肿瘤活性进行研究，通过活性追踪，追踪其抗肿瘤活性部位，筛选其体外敏感人肿瘤细胞株，并探讨其抗肿瘤作用机制，寻找其抗肿瘤活性成分。 通过研究，新近从开口箭总皂苷中又分出两个甾体皂苷，通过理化鉴定和波谱分析，单体1和单体2结构分别鉴定为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-1β, 3β, 22α, 26-四羟基-5β-呋甾-5(6）-烯-3-O-[4-O-(2-甘油)]-β-D-吡喃葡萄糖苷和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-1β, 3β, 22α, 26-四羟基-5β-呋甾-5(6）-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，为两个新化合物。其结构式如下： MTT实验结果表明，加药后培养48小时，开口箭总皂苷抑制Hela、HepG2和A549三种人肿瘤细胞生长的半数有效浓度分别为1372 g.mL-1、1221 g.mL-1和11 g.mL-1；总皂苷中流份1的半数有效浓度分别为3138 g.mL-1、2657 g.mL-1和29 g.mL-1；总皂苷中流份2的半数有效浓度分别为729 g.mL-1、562 g.mL-1和11 g.mL-1；这说明在三种癌细胞中，开口箭总皂苷、流份1和流份2A549细胞最敏感。加药后培养24小时，开口箭总皂苷、流份1和流份2对A549细胞的半数有效浓度分别为32 g.mL-1、63 g.mL-1和18 g.mL-1；加药后培养48小时，它们对A549细胞的半数有效浓度分别为11 g.mL-1、29 g.mL-1和11 g.mL-1；加药后培养72小时，它们对A549细胞的半数有效浓度分别为7 g.mL-1、18 g.mL-1和8 g.mL-1；这说明开口箭皂苷对对人肺癌A549细胞? 流式细胞术实验结果表明，加药后培养24小时，开口箭总皂苷能将A549细胞周期阻滞在G1/S期，且开口箭总皂苷、流份1、流份2在高浓度时能诱导A549肿瘤细胞坏死；在浓度分别为50 ug.mL-1、80 ug.mL-1、33 ug.mL-1时坏死和凋亡同时存在；而在浓度分别为10 ug.mL-1、10ug.mL-1、5 ug.mL-1时能够诱导A549肿瘤细胞凋亡。线粒体膜电位和活性氧实验结果表明，经药物处理和未经药物处理组区别不明显，说明开口箭可能并非通过线粒体和活性氧途径发挥抗癌作用。Hoechst实验结果表明，加药后培养24小时，随着用药浓度升高，开口箭各用药组细胞核形态发生变化，和阴性对照组相比，开口箭总皂苷、流份1、流份2在浓度分别为5g.mL-1、10g.mL-1、5g.mL-1即呈现典型的凋亡前期细胞核形态星月型，形态学实验结果表明开口箭能够诱导A549肿瘤细胞凋亡。免疫细胞化学实验结果表明，加药后培养24小时，开口箭总皂苷在浓度分别为6.25g.mL-1、12.5g.mL-1、25g.mL-1能使A549肿瘤细胞中FAS表达水平随着浓度的升高而表达增加；流份1在浓度分别为10g.mL-1、20g.mL-1、40g.mL-1能使A549肿瘤细胞中FAS表达水平随着浓度的升高而表达增加；流份2在浓度分别为3.75g.mL-1、7.5g.mL-1、15g.mL-1能使A549肿瘤细胞中FAS表达水平随着浓度的升高而表达增加；说明开口箭可能通过FAS细胞外途径发挥抗癌作用。 关键词: 开口箭；皂苷；抗肿瘤；A549；MTT法；流式细胞仪；Hoechst染色；免疫细胞化学 .. 附录 7.1清单 表3-5材料清单综合布线系统设备配置清单及报价