间充质干细胞成骨分化潜能及对骨片移植的免疫调控.pdf

中文摘要 摘要 间充质干细胞成骨分化潜能及其对骨片移植的免疫调控 stem cells，MSCs)是一类能够自我更新，具 间充质干细胞(Mesenchymal 有多向分化潜能，最早从骨髓分离的成体干细胞。它能够向脂肪、成骨和软骨细 胞分化，也可以跨胚层分化，是组织工程的一个理想种子细胞。大量的研究报道 称，MSCs能够用于心肌组织，损伤的骨组织、软骨组织和肌腱的修复和再生。 MSCs具有低免疫原性，能够提供细胞因子和生长因子支持造血干细胞的扩 增和成熟。另外，它能够与免疫系统相互作用，具有免疫抑制作用。将体外培养 的MSCs输入体内后，可诱导外周免疫耐受，并且可迁移到受损组织，降低促炎 症因子的表达，促进受损细胞的存活。令人关注的是，体内研究发现，MSCs能 够促进异体皮肤移植的存活，降低了移植物抗宿主疾病(GVHD)的发病率和疾 病进程。 本研究应用胶原酶消化骨片的方法成功分离小鼠MSCs，并在体外进行培 养。这种方法获得的MSCs具有均一的表型，不表达造血和内皮的标记分子 CDllb，CD3 MHCII类分子，但是中度表达MHCI类分子，表达一些细胞粘附分子CD29， CD44，CDl05和干细胞标志Sca一1的细胞。而且其具有塑料贴壁性，能够向脂 肪、成骨和软骨诱导分化，符合MSCs的鉴定标准。 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK， kinase)信号通路 Mitogen．activatedprotein 是调控细胞增殖分化的经典信号通路。虽然已有报道表明MAPK调节人来源的 MSCs或间质细胞系等向成骨细胞分化，但所得结论之间存在着很大差别。而 N．ternlinaI kinase)，州K(c．Jun signaI．regulated kinase)和p38如何参与小鼠MSCs 向成骨分化进行了一系列研究。实验证明，在MSCs向成骨诱导分化中，ERKl／2、 酶(ALP)的表达在诱导早期有显著提高，而后无显著改变；加入ⅢK通路抑 制剂州KII后不影响ALP和钙的沉积；而加入p38通路抑制剂SB203580后， 可显著抑制MSCs中ALP的表达和钙的沉积。通路抑制剂对Mscs向成骨分化 的影响呈剂量依赖性。另一方面的结果表明，p38通路在MSCs向成骨分化中起 正调控作用，ERK通路可能在早期起负调控作用，而刷K通路在分化过程中的 作用不显著。活化的T细胞也能够促进MSCs向成骨分化，并且在一定范围内， ’ 中文摘要 随着T细胞与MSCs的比例增加，碱性磷酸酶(ALP)的活性也随之增强。而且 MAPK通路也参与了活化的T细胞诱导MSCs向成骨分化的调控，在MSCs与 ALP的表达。 中ALP的表达，加入ERKl／2和州K通路抑制剂后不影响MSCs 支架、细胞、因子是骨组织工程中研究的三大问题，支架材料作为研究的基 础，必须具有良好的生物安全性和组织相容性，并且能够创造一种微环境，以利 于细胞的粘附、增殖和功能的发挥。聚酯和钙磷盐是目前骨组织工程中研究的最 多的支架材料。本研究中采用的两种材料，PLGA和PLGA厂rCP。一方面观察两 种材料在体外与MSCs的粘附特性；另一方面观察将复合骨片移植到体内后所产 生的免疫反应。本实验将不同MSCs细胞浓度接种到两种生物材料上，观察到当 接种浓度为2×105时接种率最高，并且在此浓度下诱导14天时，ALP活性相对 较高。用统计学方法分析两种材料的接种率和ALP活性表达之间没有显著性差 异，可能这两种材料的结构对细胞的支撑作用相似。但是在实验中发现， PLGA仃CP比单一的PLGA拥有更