环境雌激素17β-E2对栉孔扇贝内分泌干扰的作用机制.pdf

摘要 摘要 环境内分泌干扰物 （Endocrine disrupting chemicals, EDCs ）是指能够影响生物体正常 内分泌行为的外源性化学物质。这些物质通过影响生物体体内激素的合成、贮存、分泌和 转运，使内分泌系统失调，进而阻碍或干扰繁殖、生长发育等正常生物功能。目前，有关 EDCs 影响或干扰生物内分泌的研究主要集中在脊椎动物。无脊椎动物占动物种类数的95% 以上，其研究主要是集中在有机锡污染导致螺类雄性化方面，而关于环境雌激素对无脊椎 动物内分泌影响的研究则相对缺乏。近年，各国相继发现沿海双壳类生物性腺组织发生性 畸变（雄性雌性化），这对无脊椎动物的繁殖、种群稳定和生态功能产生了潜在的危害。 因此，揭示双壳类发生性畸变的毒理机制是一个重要的环境科学问题，对加强环境 EDCs 的风险管理具有重要意义。 本研究以我国沿海广泛分布并具有重要经济价值的栉孔扇贝（Chlamys farreri ）为研究 对象，首先利用LC-MS/MS 分析了栉孔扇贝繁殖周期的内源激素水平变化，发现随着性腺 发育精巢组织中睾酮 （testosterone ，T ）由低到高达到一个峰值后降低，而雌二醇 （17β-estradiol, E ）的浓度水平随着性腺发育逐渐升高，但在成熟期之前急剧下降，并没 2 有表现出和性腺发育相同的趋势；而雌酮（estrone，E ）浓度水平明显低于E 和T，并且 1 2 在整个繁殖周期没有发生明显变化；卵巢组织中E2 水平明显高于精巢，并在成熟期达到最 高值，排卵后迅速下降，并与性腺发育周期变化相一致。而 T 的浓度水平呈现两个峰值。 另外，E1 的浓度水平较精巢略高。这些结果表明内源性激素与配子发育具有相关性。在此 基础上，对繁殖相关基因：Vtg 、ER 、CaM-1 和CaM-2mRNA 的表达水平进行定量，发现 Vtg 和CaMs mRNA 表达水平随性腺发育呈上升趋势，而ER mRNA 表达水平则始终保持 较低水平，说明雌激素的作用并不是通过ER 受体途径，而是可能存在其它的作用途径。 为了进一步探讨雌激素的作用机制，我们利用二代高通量测序技术（454 ）测定了暴 露于E2 条件下栉孔扇贝性腺的转录组，共得到了51997 个Unigene ，平均读长达626bp 。 差异基因表达的分析结果表明：60 个Unigene 在对照组与暴露组样品中具有明显的差异表 达，并有32 个unigenes （性腺）随着暴露浓度增加表达量增加。同时，此次数据库中也发 现了大量有关分子功能、细胞组分以及生物学过程如生长，发育，繁殖和信号转导的基因， 这为探索外源雌激素对软体动物的作用机制奠定了分子生物学基础。 关键词：栉孔扇贝；雌激素；机制；LC-MS/MS；454 测序； Ⅰ Abstract Abstract Endocrine disrupting chemicals (EDCs ) are chemicals that at certain doses, can interfere with the endocrine (or hormone system) in organisms. These disruptions can cause cancerous tumors, birth defects, and other developmental disorders. Any system in the body controlled by hormones, can be derailed by hormone disruptors. Most research on adverse effects of EDCs has