ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用.pdfVIP

主堡塞堕里型盘查!!!!芏!旦筮!!鲞箜!塑竺塑!!垦翌QP!尘!!坐!!：!!e!!坐!!!!!!!：!!!：!!：盟!：1 787 ·实验研究· ROCK抑制剂Y．27632在角膜保存时对角膜缘 干细胞活性的促进作用 王瑶 段豪云 杨玲玲 曲明俐 周庆军 【摘要】 背景角膜缘干细胞(LSCs)对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用。Rho关联 卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y一27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生，减少细胞凋亡。 目的 探讨Y一27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响。方法 在细胞培养基MEM中加入质 量分数12．5％硫酸软骨素、质量分数10．0％低分子右旋糖酐、20．0mg／L地塞米松、100mg／L妥布霉素注射 液、9．5 L一谷氨酰胺，制备成角膜活性保存液。将新西兰大白兔的角膜组 g／LHepes，使用时添加0．375mg／L 织片分别置于含或不含Y．27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d，采用质量分数0．25％锥虫蓝和质量分数 0．2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态，采用Giemsa染色法并使用ImageJ图像分析软件计数克 结果 隆球数量和LSCs活性，计算LSCs存活率和克隆形成效率。角膜片保存4d时，Y-27632保存液组和 单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别，角膜片保存7d时，Y一27632保存液组角膜内皮细胞形 态仍保持规则的六边形，而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩，少数细胞体积变大。角 膜片保存14d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑。单纯角膜中期保存液组角膜内 皮细胞计数为(2262±75)／mm2，Y一27632保存液组角膜内皮细胞计数为(2425+95)／ram2，差异有统计学意义 (P0．001)。新鲜角膜片和角膜片保存4d时，Y一27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均 d和14 较大，其内细胞数较多，而保存7 d时，与Y．27632保存液组比较，单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球 直径明显缩小。新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时，Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的 d和14 克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义(均PO．05)；角膜片保存7d时，角膜缘上 皮细胞的活性率分别为(73．004-2．12)％和(56．00±0．71)％，明显高于单纯角膜中期培养液组的(66．00± d 和14d时，Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为(11．05±o．21)％和(3．10± 1．97)％，明显高于单纯角膜中期保存液组中的(2．05±1．20)％和(0．40±0．14)％，差异均有统计学意义(t= 果，同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力。Y一27632可作为角膜保存液的有效添加成分。 【关键词】 Rho相关激酶／拮抗剂＆抑制剂；细胞培养；角膜缘／细胞学；干细胞；角膜上皮；细胞生 存／药物作用；角膜保存；兔 The effectsofROCKinhibitorY-27632onthe oflimbalstemcellsincorneal promoting activity preservation medium Provincial WangYao，Duan Mingli，Zhou of Haoyun，y口昭Lingling，QuQingjun．ShandongKeyLaboratory ophthalmology，ShandongEyeInstitute，Q