靶向神经纤毛蛋白-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对人T淋巴瘤细胞靶基因沉默作用.pdfVIP

·2122· 垦!鱼』垦!仑!!垡：!!唑翌鲢旦盟玉里■丝掣 虫堡塞坠处型盘查2Q!!生!旦筮!!鲞笠!塑 ·实验研究· 靶向神经纤毛蛋白一1基因RNA干扰慢病 毒载体的构建及对人T淋巴瘤细胞靶基因 沉默作用 王红梅张梦瑾徐振媛杜秀平韩正祥 【摘要】 目的 构建靶向神经纤毛蛋白．1(NRP-1)基因的RNA干扰慢病毒表达载体 [pLB．NRP．1／短发卡RNA(shRNA)]，并观察其对人T淋巴瘤Jurkat细胞靶基因NRP一1的沉默效应。 方法设计、合成3对人NRP．1的特异性干扰序列(NRP一1／shRNAl·3)和1对非特异性对照序列 I、XhoI双酶切线性化的慢病毒载体pLB中，得到 (NRP．1／shRNA4)，分别亚克隆至经Hpa pLB—NRP一1／shRNA重组慢病毒质粒；经酶切和测序鉴定成功后，与包膜质粒pCMVA8．91、被摸蛋白 质粒pMD．G重组并包装成为慢病毒表达载体；将其感染至Jurkat细胞；分选阳性细胞后应用荧光定 量聚合酶链反应(PCR)和Westernblot检测对NRP一1mRNA和蛋白表达的沉默效应。结果酶切 和测序结果证实3个靶向NRP一1基因的慢病毒载体构建成功，包装成慢病毒滴度可达108IU／ml；感 染Jurkat细胞后，NRP一1mRNA表达量分别下降了95．9％、92．3％、87．1％，NRP一1蛋白的表达量分 别下降了33．8％、29．7％、17．9％，与对照组比较差异有统计学意义(Po．05)，shRNAl为最佳干扰 靶序，pLB—NRP一1／shRNAl为最佳干扰靶序列慢病毒表达载体。结论成功构建慢病毒表达载体可 高效感染体外培养的人Jurkat细胞株，并可显著抑制靶基因NRP一1mRNA和蛋白的表达。 RNA干扰；短发卡RNA； 【关键词】 慢病毒载体； 神经纤毛蛋白一1；T淋巴瘤 Constructionoflentiviralvector interferenceRNA andits expression targetingneuropilin一1gene effecton ofT—ceil celllines silencing targetinggene lymphoma Menafin，Xu WangHongmei，Zhang Medi— Zhenyuan，DuXiuping，HanZhengxiang．DepartmentofOncology，theAffiliatedHospitalofXuzhou cal College．Xuzhou221000，吼ina author：Han Corresponding Zhengxiang，Email：cnhzxyq@163．corn Toconstructrecombinantlentiviralvector interferenceRNAtar— 【Abstract】Objective expression anddetectits effecton NRP一1．Methods getingneuropilin一1(NRP一1)genesilencing targetinggene Threesmall RNAinterference NRP一1 hairpin sequencestargeting gene(shRNAl，shRNA2，and shRNA3)andcon