饲用葡甘露低聚糖酶法制取.docVIP

饲 用 葡 甘 露 低 聚 糖 的 酶 法 制 取 摘 要：葡甘露低聚糖是一种重要的双歧因子，近年来已被作为一种功能性饲料添加剂，成为动物营养研究的新方向。试验通过对黑曲霉酸性 β-甘露聚糖酶酶解魔芋粉制备甘露寡糖进行条件研究，获得了以葡甘露低聚糖为主的酶解产物。酶解条件为：用煮沸的 pH 值 3.5 的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制 180 g/l 的魔芋粉溶液，加酶量按 30 IU/g 魔芋粉计算，酶解水浴温度为 65 ℃，酶解时间为4 h。酶解结束后，将酶解液进行高温灭菌并接种酿酒酵母进行发酵，发酵温度为 30 ℃，摇床转速200 r/min，发酵 20 h 后将发酵液离心，所得上清液即为不含单糖的葡甘露低聚糖，得率可以达到35.73%（以魔芋粉计）。 关键词：葡甘露低聚糖；β-甘露聚糖酶；魔芋粉 葡甘露低聚糖是双歧杆菌和乳酸菌最好的生长 因子之一，除具有一般低聚糖的双歧因子功能外，尚 具有吸附、排除人和动物肠道病原菌，调节免疫功能， 增强人和动物非特异性免疫活性，促进肝脏合成甘露 糖结合蛋白等独特的生理功能。近年来已被作为一种 功能性饲料添加剂，成为动物营养研究的新方向(张 力华等，2006) 。葡甘露聚糖是魔芋块茎特有的主要成 分，是由 d-葡萄糖和 d-甘露糖按 1： 1.6 摩尔比以 β- 1，4 糖苷键连接的杂多糖，其含量约为 44%～64%。β- 甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖、葡萄甘露聚 糖、半乳甘露聚糖及半乳葡萄甘露聚糖的内切酶，β- 甘露聚糖酶水解植物胶(如角豆胶、瓜儿豆胶和魔芋 等)可生成低聚甘露糖，引起了国内外食品、医药、动 物饲料添加剂等领域的兴趣。文中对 β-甘露聚糖酶 酶解魔芋粉制备葡甘露低聚糖的条件进行研究。 1 材料与方法 1.1 酸性 β-甘露聚糖酶的来源 黑曲霉 Aspergillus niger MA-56 由本课题组筛选 分离获得，为酸性 β-甘露聚糖酶高产菌株（李艳丽 等，2009；许少春等，2009）。发酵培养基（以 10 g 干基 为标准）：麸皮 8 g、豆粕 2 g、魔芋粉 0.1 g。发酵条件 为：固形物与加水比 10： 9，接种孢子悬浮液 2.5 ml （以一支菌种斜面加 30 ml 无菌水为标准），300 ml 三角瓶中装量 7 g 培养基，发酵 56 h 时，产酶量达 到1 200 IU/g。 1.2 粗酶液的制备 将发酵好的培养物于 40 ℃鼓风烘干，并用高速 粉碎机磨成细粉。称取固体酶样 8 g，加入 100 ml 蒸 馏水，40 ℃抽提 1 h，用滤纸过滤，得到酸性 β-甘露聚 糖酶粗酶液，酶活力达 100 IU/ml。 1.3 材料和试剂 麸皮、豆粕等发酵主原料由富阳新发生物技术有 限公司提供；魔芋精粉购自武汉市强森魔芋食品有限 Abstract：Oligo-glucomannan is a kind of important bifidus factor, it has been applied to animal feed additive field. Konjak powder can be hydrolyzed to oligo-glucomannan by β -mannanase. The optimal enzymatic condition for oligo -glucomannan production was: 180 g/l of konjak powder, 30 IU/g of β - mannanase, and then incubated at 65 ℃ for 4 h. The enzymatic hydrolysate was fermentated at 30 ℃ for 20 h by saccharomyces cerevisiae. Oligo -glucomannan production was reached 35.73 g/100 g konjak powder. Key words：oligo-glucomannan；β-mannanase；konjak powder 试 验 研 究 《饲料工业》·2011 年第 32 卷第 2 期 47公司；纯硅胶板 60F 254 为德国默克公司产品。 1.4 魔芋粉水解率的测定 将适量的 pH 值 3.5 的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲 液加热煮沸，直接加入称好的魔芋粉中，不断搅拌至 魔芋粉溶解，配成不同浓度的魔芋粉溶液。向魔芋粉 溶液中加入一定活力单位的 β-甘露聚糖酶液（加酶 量以 IU/g 魔芋粉计），于 65 ℃水浴中酶解一定时间， 酶解结束后酶解液经煮沸 10 min 灭酶、离心，取上清 液适当稀释后，用 DNS 法测定酶解液中的还原糖量 （以甘露糖计）。魔