噬菌体的效价测定课程.pptVIP

★噬菌体的效价测定 ★一步生长（One-step growth) ★一步生长曲线 温和噬菌体与溶源性① * 效价(滴度Title)-------是微生物或其产物、抗原与抗体等活性 高低的标志。 噬菌体效价--------指噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位（plaque forming unit/ml或pfu/ml)表示其效价。 高浓度敏感细菌 ＋ 适量噬菌体 相混合一定时间 (5min) 除去游离噬菌体 进行高倍稀释 培养 定时取样测定噬菌体数 ★测定噬菌体生长的方法 潜伏期（latent phase)＝eclipse phase + intracellular accumulation phase)—从噬菌体吸附菌细胞至菌细胞释出新噬菌体的最短时间。 裂解 期（rise phasse)—宿主裂解，噬菌体数不断增加的时期。 平稳期(plateau phase)—宿主全部裂解，噬菌体达最高点后的时期。 裂解量(Burst phase)—每个被感染细菌释放新的噬菌体的平均数。 裂解量(Burst phase) = --------------------------------- ★进行一步生长曲线的测定，能了解噬菌体在菌体内的最短潜伏期，和平均收获量，还可测知理化因素的变化对噬菌体感染循环的时间和对每个被感染噬菌体释放噬菌体的影响。 裂解期平均噬菌体数 潜伏期平均噬菌体数 ★裂解量 (2).The Lysogenic Life Cycle of Temperate Bacteriophages Adsorption Penetration Prophage Formation Maintaining the Prophage during the Lysogenic Life Cycle Replication Maturation Release But ,following spontaneous induction, The bacterium inserts its genome into the bacteriums nucleoid to become a prophage. As the bacterium replicates, the prophage replicates as a part of the bacteriums nucleoid. Fig. 1: Lysogenic Life Cycle of a Temperate Bacteriophage ★温和噬菌体(temperate phage)----吸附并侵入细胞后，噬菌体的DNA整合在宿主的染色体组上，并可长期随宿主DNA的复制而同步复制，因而在一般情况下不进行增殖和引起宿主细胞裂解的噬菌体, 如E.coli的 ? 、P1、P2，Salmonella typhimurium的P22等。 ★原(前)噬菌体(prophage)----处于整合态的噬菌体核酸。 ★温和噬菌体的特点——1.其核酸的类型都是 dsDNA; 2.具有整合能力；3.具有同步复制能力。 Lambda-Phage (E.Coli) Drawing of phage lambda Lambda-Phage ★溶源性(lysogeny)------温和噬菌体侵染敏感细菌后不裂解它们，而与细菌共存的特性。 ★温和噬菌体的三种存在形式：游离态 整合态 营养态 ② ★溶源性细菌(lysogen或lysogenic bacteria)——在核染色体组上整合有前噬菌体并能正常生长繁殖而不被裂解的微生物。 ★溶源性菌株的命名： 如：E.coli K12(?) ③ ★温和噬菌体在细菌染色体上的整合位置： 就目前所知，所有温和噬菌体的核酸都是双链DNA。按照温和噬菌体DNA与细菌DNA结合部位的不同，又可将其分成两类： ①只有一个特定结合部位的温和噬菌体： 如： 大肠杆菌的 ? 噬菌体 ②具有多个或不定部位的温和噬菌体：