Pun1蛋白的辣椒素合酶活性及其作为辣椒素积累决定因素的证据.pdf

◆国外琼望◆ 2015年第2期 辣椒杂志(季刊) PunJ蛋白的辣椒素合酶活性及其作为 辣椒素积累决定因素的证据 Kana r|Murota．Hanak0shimurat ogawa．Ka{sun0 Misak|Furuya．Yasuko Togawa． 7_旮，@snf／妇括￡，，nu，aand D60一粥，日本) (北海道大学农学研究院，S聊orD 摘 要 背景：辣椒素类物质，包括辣椒素及其类似物，是导致辣椒果实辛辣的原因。尽管辣椒素为人熟知 并且每天都会用到，但是对于辣椒素合成途径中的相关基因并不是完全了解。已有研究表明，pAMT和Punl 编码的蛋白分别催化辣椒素合成途径中的第二步和最后一步反应，并且Punl编码的蛋白具有辣椒素合酶 活性。然而，并没有直接的证据证明Punl具有辣椒素合酶活性。 结果：为了证明Punl蛋白在辣椒素合成中的作用，我们利用大肠杆菌合成了抗Punl蛋白抗体．利用该 的特异性。在Punl下调表达的胎座组织中，利用该抗体进行westemblot，检测到Punl蛋白的积累减少．同 时辣椒素在胎座中的积累量也降低。从胎座组织中分离得到原生质体。在体外进行辣椒素的从头合成，加入 素的高水平积累总是伴随着pAMT和Punl的高水平表达，也就是说这两个基因对辣椒素合成很重要。比较 有辣味辣椒和无辣味辣椒的香草基胺(辣椒素合成的前体物质)和辣椒素的积累水平，结果表明：在辛辣味 辣椒中香草基胺的含量很低，推测可能是香草基胺合成之后，Punl把香草基胺快速转化为辣椒素；而在无辣 味辣椒中由于缺乏Punl，香草基胺的含量积累到很高的水平。 结论：对辣椒素从头合成途径和抗Punl抗体进行原生质体试验，证明了Punl基因及其产物参与了辣 椒素的合成。与辣椒素的积累相比较，分析香草基胺的积累过程，揭示了Punl是辣椒素和香草基胺积累水 平的决定因素。 关键词 capsjcu埘；pAMT；Punl；原生质体试验；辛辣；香草基胺；病毒介导的基因沉默 椒的栽培种已经发展为一种蔬菜。已经有研究表明 1 背景 无辛辣味的辣椒不能积累辣椒素类物质，但是可以 辣椒素是导致辣椒辛辣味的化合物…。辣椒素 积累辣椒素酯类物质如辣椒素酯，辣椒素酯类物质 及其类似物统称为辣椒素类物质，大部分辣椒素类 是辣椒素类物质的类似物(香草基醇的支连脂肪酸 似物是一种香草基胺的支链脂肪酸酰胺。辛辣昧辣 酯)，它没有辣椒素类物质的刺激性㈣。 椒开花后20～30 d，在胎座组织中合成辣椒素类物 辣椒素合成包括两个途径：(1)从苯丙氨酸到 质，而辣椒素类物质只能南辣椒属物种合成121。辣椒 香草基胺的苯丙烷途径；(2)从缬氨酸到8一甲基一6 素类物质常用于人类日常饮食中，产生辛辣味道并 壬烯辅酶AM”。有研究认为香草基胺和8一甲基一6 发挥人类机体的某些生物活性，例如促进发热岬j和 壬烯辅酶A的缩合反应是南辅酶A依赖的酰基转 减肥㈣。此外，由于辣椒素类物质有潜在的抗氧化生 移酶催化的。虽然辣椒素合成途径中的基因已被广 物活性『61和抗癌作用㈣，所以还可用于制药行业。尽 泛研究，但是直到Kim等报道SB2—66作为候选基 管辣椒的辛辣是一个不错的特性，但是无辛辣味辣 因，调控香草基胺酰化的基因m呀研究清楚。Stewan 42 万方数据 辣椒杂志(季刊) 2015年第2期 ◆国外隙望◆ 等¨3嘬终证明SB2—66是辣椒素合成途径中由AT3抗