不同甘蔗品种DNA甲基化分析.pdf

2015年第4期(总第159期) 农业研究与应用 (GeneralSerialNo．159)No．42015 AGRICULTURALRESEARCHANDAPPLICATION July 不同甘蔗品种DNA甲基化分析 陈家慧t杨荣仲2周会2 (1广西大学农学院，南宁530005；2广西农业科学院甘蔗研究所／中国农业科学院甘蔗研究中心／ 农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室／广西甘蔗遗传改良重点实验室) 摘要：DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式之一，在基因表达调控中发挥着重要的作用。 本研究应用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术，在全基因组水平上研究不同品种甘蔗伸长期和 成熟期CCGG位点的DNA甲基化水平及模式变化特征。结果表明，在伸长期，8个甘蔗品种检测 基化模式存在差异，甘蔗CCGG序列中胞嘧啶甲基化内侧胞嘧啶全甲基化多于外部胞嘧啶半甲基 化。 关键词：甘蔗DNA甲基化MSAP 广西是国内主产蔗区，蔗糖业是广西重要支柱 技术基础上建立起来的，之后被用于水稻基因组胞 产业。自20世纪90年代初，广西蔗糖业成为全国嘧啶甲基化的检测上[62，现已广泛应用于棉花、苹 第一后，广西甘蔗生产占有的比重不断增加，进入 果、拟南芥、香蕉、土豆、草莓等植物上，评估胞 21世纪以来广西蔗糖年产量占全国食糖总产量的 嘧啶甲基化的程度和模式[7_12]。鉴于此，研究从表观 60％以上【】】o 遗传学的角度出发，采用MSAP技术检测不同甘蔗 品种不同时期的甲基化多态性，分析甘蔗生长过程 DNA甲基化是一种表观遗传(epigenetic)现 象。在发育过程中，虽然基因表达调控发生改 中DNA甲基化水平、模式与变化，为进一步开展 变，但DNA的一级结构没有变化，它可以遗传， 相关研究奠定基础。 也可能发生逆转(脱甲基化)【21。在高等植物中， 1材料与方法 胞嘧啶甲基化在基因表达调控中扮演了很重要的 1．1材料 角色嘲。检测DNA甲基化的方法有多种，MSAP Sensitive 供试8个甘蔗品种信息列于表1。试验材料种 (MethylationAmplificationPolymor— 植于广西农业院甘蔗研究所本部试验农场。 phism，甲基化敏感扩增多态性)技术，是在AFLP 基金项目： 业科学院基金项目(2014YZ02，2014YZ03)。 作者简介： 陈家慧，女，研究生，生物技术专业。 通信作者： 杨荣仲。 收稿日期： 20l5—05—28 万方数据 12 农业研究与应用 1．2总DNA提取与MSAP分析 2结果与分析 选取生长正常的伸长期和成熟期单株，取其1 2．1 DNA质量检测 叶用于DNA提取。DNA提取及MSAP分析参照 Xiong方法实施【13】。 1．3数据处理 标记MSAP扩增片段大小，以0和l建立数据 库。在相同迁移率位置上，有带的记为1，无带的 2斗L纯化的基因组DNA用0．8％琼脂糖凝胶检测结 记为0。参照DNA分子标记数据分析方法，将果如图1、图2所示，DNA主带清晰，降解较少， 适合进行下一步分析。 MSAP标记作为等位基因进行多态性研究，每1条 扩增条带视为1个性状。 l 2 3 图1 甘蔗伸长期基因组DNA提取质量检测 图2甘蔗成熟期基因组DNA提取质量检测 图1中1～8分别为柳城05一136、桂糖2．2甘蔗品种甲基化分析 03—1438、桂糖05—3