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L—异亮氨酸高产菌育种机理的初步研究.pdf
维普资讯
第17卷 无 锡 轻 工 大 学 学报 Vol_l7
第 1期 JOURNALOFWUXIUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY 1998No.1
一一1L7
异亮氨酸高产菌育种机理的初步研究
张伟 国
’ — ‘。 。。 。 ‘ ’ ‘一
无锡轻工大学中央研究所,无锡 214036)
陈 坚 / 伦世仪
无‘锡轻工大学生物工程学院r尤锡 ∞∞
,T1.,^ 11
摘要 研究了黄色短杆菌生物合成L一异亮氨酸代谢控制途径,结果表明,选育L
异 亮氨酸高产菌必须首先活化磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 (PC)、天冬氨酸教酶
(AK)、高丝氨酸脱氢酶(HD)、苏氨酸脱氢酶(TD)和乙酰羟基酸合成酶(As)这五
个 关键酶,并减弱 由丙酮酸激酶 (PK)、柠檬酸合成酶 (CS)、天冬氨酸 脱覆酶
(AD)、二羟吡啶二羟酸合成酶 (Ps)和高丝氨酸一0一转 乙酰酶 (HT)引起的五条分支
代谢强度,从而强化生物合成L异亮氨酸的主代谢流。根据这一育种思想.以黄色
短杆菌 (Brevibacterium 几 zATCC14067)为出发菌株,采用相关的氨基酸结构
类似物进行定向育种,有 目的地活化PC、AK、HI)、TD和AS等酶,筛选获得的L
异亮氨酸高产菌zQ 4,产酸选28~30g/L.
关键词 :墨圭叁墼:互 ;董鱼璺堑堕
中图分类号 TQ922
0 前 言
黄色短杆菌 ATCC14067是一株谷氨酸产生菌 ,以它为出发菌株经物理和化学诱变处
理,氨基酸结构类似物定向选育,获得L异亮氨酸高产菌 zQ 4.笔者对zQ 2菌的育种机
理作初步探讨
l 材料与方法
1.1 菌株
1.1.1 出发菌株 黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)ATCC14067.
1.1.2 异亮氨酸产生菌zQ一4 由黄色短杆菌ATCCI4067选育而得
1.2 培养基
1.21 种子培养基 葡萄糖 2.5:(NH )2SO.0.5;KH!POd0.1;MgSO.’7H200.05;玉
米浆 4.0;CaCO31.0;
1.2.2 发酵培养基 葡萄糖 13.5;(NH.)2SOd3.75;KH2PO 0.1;MgSO ’7H_~O0.05;
裔日期 :1997-05—21
一 作者:张伟国·男,1963年2月生 ·博士生 ·高级工程师 f
、
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2O 无 锡 轻 工 大 学 学 报 第 17卷
玉米浆 2.0;CaCO 3.0.
1.3 分析方法
1.3.1 茵体生长 吸收0.2ml样品菌液到 5ml0.25mol/LHCI溶液中,摇匀,采用 721
分光光度计 ,1cm 光程 562Dill下测定OD值。
1.3.2 pH 用精密pH 试纸和酸度计测定 。
1.3.3 葡萄糖 菲林试剂滴定法 ]
1.3.4 L一异亮氨酸 纸上层析法、比色定量法口一及氨基酸 自动分析仪测定。
2 结果与讨论
2.1 黄色短杆菌 ATCC14067生物台成 I一异亮氨酸的代谢调节机制 .
以葡萄糖为原料生物合成 L一异亮氨酸涉及到 EMP、HMP、TCA、乙醛酸循环 、伍德一抚
克曼反应,以及苏氨酸合成水平和分支链氨基酸合成水平的调节控制。由于各系统之间相
互连结,分析起来不大方
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