肝细粒棘球蚴周围纤维囊壁形成机制初步探索.pdf

摘要 目的：肝包虫侵入人体以及绵羊个体后，会在正常肝脏部位形成病灶-包囊。演化过程中，肝包虫不 断的侵蚀正常肝脏，使其逐步形成纤维化结构，即靠近虫体的外囊和靠近肝实质的外膜。本文旨在 寻找肝包虫周围纤维囊壁形成过程中，人类和绵羊肝脏组织基因组水平上的变化情况。 1. 对正常肝脏组织和病灶组织进行分子标记分析，寻找发生变化的基因位点。 2. 采用激光显微切割技术以及指纹图谱分析技术，寻找基因组水平上的变化。 方法： 1. 通过 RAPD 分析，寻找病灶组织中多态性位点的变化。 2. 利用克隆载体构建技术，制备特异性探针以及表达谱差异基因克隆。 3. 采用激光显微切割技术获得病灶发展过程中不同时期、不同种类的细胞。 4. 应用放射性标记和荧光标记技术，进行正常以及病灶组织指纹图谱的绘制。 结果： 1. 针对纤维化肝脏组织的特殊性，对肝脏基因组 DNA 的提取条件进行了优化，寻找到了适合纤维 化肝脏组织的 DNA 提取方法，例如通过石英砂加大研磨力度，增加超声处理环节、延长预处理 时间等。最后确定液氮和石英砂混合的方法处理，短暂超声破碎细胞核酸，增加一步抽提环节， 并获得了良好的效果。 2. 通过简单的实验，分别确定了绵羊肝脏组织和人类肝脏组