赖氨酰tRNA合成酶启动子及研究.pdfVIP

硕士论文 赖氨酰tRNA合成酶的启动子研究 摘 要 氨酰tRNA合成酶是一类能催化tRNA与特定氨基酸前体发生酯化反应的酶，氨酰 tRNA合成酶不但是蛋白质合成过程中的一类重要的酶，还参与了转录、翻译水平的调 控、RNA剪接、信号传导以及免疫等生命活动。自然界中存在2种结构完全不同的赖 (BacilluseelelLg 因，tys憨Z是非必须基因，而lysRSII是必须基因，伽脚前期不表达，后期表达，因 的生物学功能有非常重要的意义。 662bp长度的片段，通过基因工程的方法将GFP基因片段连接到启动子3’端之后，构建 了不同长度启动子的基因工程菌，并研究了所构建的基因工程菌的荧光表达情况，通过 因片段后，GFP的表达情况并没有受到影响，并且当敲除掉662bp的片段后，荧光强度 更加强。 2，我们进一步研究了lysRSI基因的转录起始位点，通过反转录加G尾，然后测序 转录起始位点与我们上述得到的现象一致，解释了上述观察到的现象，但并没能解释敲 始位点，通过同样的方法，我们确定敲除662bp后，其转录起始位点位于pUBCl9质粒 上。 3，我们在pUBCl9质粒紧靠启动子的5’端插入tlt2转录终止子，通过基因工程的 办法将不同长度lysRSI基因启动子连到终止子之后，观察插入终止子后对GFP表达的 光影响较明显，这更进一步验证了敲除662bp后的转录起始位点位于pUBCl9质粒上。 4，我们对lysRSI启动子进行了6个突变，并且观察了不同突变后的荧光效果，突 变主要围绕lysRSI基因启动子上的茎环结构，通过突变我们研究了茎环结构对lysRSI 基因表达的影响，T1突变与B．c ptt-pG在LB中没区别，但在无机盐培养基中差别较大， 1r2和T3经突变后没有荧光，T4突变后在LB中有荧光，但荧光较弱，T5和T6突变， 两者突变后效果一致，都部分含有荧光。 关键词：氨酰tRNA合成酶突变基因工程启动子 Abstract 硕士论文 Abstract isa which ofaminoacids synthetasespecificenzymeCall aclass Aminoacyl-tRNA catalyze tRNAto an isnot all precursor、析thproduceesterification．Aminoacyl-tRNAsynthetaseonly classof inthe of alsootherlifeactivities importantenzymesprocessproteinsynthesis，but involvedin level regulation，RNA transduction，and transcription,translationsplicing，signal immune．Therearetwokindsofstructures different in completelylysyl-tRNAsynthetase forthetranslationof codons．And responsible nature，LysRS-I，LysRS-II，which lysine Bacillus cereus the