歇素组分Ⅲ抑制人白血病细胞增殖与作用机制及研究.pdf

摘要 蝎素组分Ⅲ抑制人白血病细胞增殖 及其作用机制研究 博士研究生：宋向风 导 师：刘玉峰教授、主任医师 郑州大学第一附属医院儿科 摘 要 目的 臼血病和淋巴瘤是临床上常见的盘液系统恶性肿瘤，嚣静对于自血病和淋 巴瘤的治疗主要是化疗和放疗，但化学合成药物和放疗往往具有很大的毒副作 用，对正常的细胞有极大的损伤，因此许多学者致力于从毒副作用相对较小的 中莼中寻找抗肿瘤药物，并取得了～定的成就。全蝎或蝎毒作为传统的中药已 经有几干年的应用历史。蝎毒为全蝎的主要活性物质，存在于蝎尾部毒囊内。 蝎毒的生物活性成分主要是蛋自质，它们具有广泛的药理学作用。近年来国内 外有关蝎毒抗肿瘤的研究有不少报道，僵其抗肿瘤的机制还不完全清楚。本研 venom 究探讨蝎毒组分III(scorpion Ill，SVClll)在自血病和淋巴瘤 component bloodmononuclear 和入夕}周血单令核细胞(peripheral cells，PBMC)增殖的影响， 进一步探讨TSVCIII对THP—l和Jurkat细胞细胞周期及对核因子．KB(Nuclear factor-rB，NF．K8)活性的影响。 方法 健康人外周血分离的PBMC分别接种予96孔细胞培养板，每孔2×104细胞数， 摘要 增殖情况，并推算SVCIII对刁i同细胞的半数抑制率(IC50)。 IC50和 2．选取THP．1和Jurkat两种细胞接种于24孔细胞培养板，用1／2 Iodide， PI)对细胞进行染色，沈涤并收集细胞在流式细胞仪上检测细胞周期的分布。 3．将THP．1和Jurkat细胞接种于6孔细胞培养板，用1／2IC50和IC50浓 度的SVCIII处理细胞，在不同时间点收集细胞，用蛋白提取试剂盒提取细胞总 蛋白或胞浆蛋白和胞核蛋白，用Western blotting方法分别检测cyclinD1、p65、 11cB仅和P．1rBct蛋白的表达情况。 4．将THP．1细胞和Jurkat细胞以每孑L2×105细胞数分别接种于24孔细胞 培养板，用1／2 mRNA的表达。 细胞的总RNA，RT-PCR方法检测细胞p65 染NF．cB荧光素酶报告基因质粒，转染42 IC50 h后用不同浓度的SVCIII(I／2 和IC50)束U激6h，收集细胞并裂解细胞，取上清加入荧光素酶底物，迅即在发 光检测仪上检测荧光强度。与对照组比较，计算SVCIII各处理组的相对荧光表 达情况。 核蛋白提取试剂盒分别提取细胞的核蛋白，用化学发光法EMSA检测NF．r,B特 异探针与NF．r,B转录因子的结合。 睦田 皇口术 1．SVCIll对自血病细胞增殖的影响MTT结果显示SVCIIl对四种白血病 PBMC的抑制作用不明显，无统计学意义。同时发现这四种白血病细胞对SVCIII 36．44I，tg／ml、27．10I-tg／ml和29．04}tg／ml。 2．SVCIII对THP．1和Jurkat细胞细胞周期的影响白血病细胞THP—l和 Jmkm细胞经1／2 细胞数明显增加，G2期及S期细胞数减少，并且随着药物浓度的增加G0／G1 期细胞比例逐渐增加，S期细胞比例逐渐减