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青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 微生物快速检验技术探讨 蔡向荣 青岛高科园海博生物技术有限公司 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 微生物检测关键点 好的检测方法 高质量的培养基或仪器 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 微生物检测的基本思路 前增菌培养(培养基中不含抑菌剂) 选择性增菌培养或增菌培养 选择性分离培养或分离培养 生化鉴定或血清学鉴定 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 微生物快速检测技术定义： 在尽可能短的时间内,检测出目标微生物。 微生物快速检测方法特点： 1、快速：一般在几小时至24小时内； 2、灵敏度高、特异性高； 3、操作和使用尽可能简单； 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 选择快速检测方法的依据 1、GB/T 4789.32-2002食品卫生微生物学检 验--大肠菌群的快速检测 2、GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准 检验 方法微生物指标 3、GB标准和SN标准中使用的测试片方法 以上标准中都规定使用快速检测方法，主 要是指酶底物法。 4、FDA、USDA-FSIS、ISO、AOAC等标准推荐 使用微生快速检测方法 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 快速检测方法分类 显色培养基法：技术成熟，产品很多。 免疫学方法：产品最多，特异性和敏感性都很 高，但有假阳性存在，阳性结果需要确认。通常 的原理有EIA，ELISA，GLISA，荧光酶免、免疫磁 分离等方法。市场上的产品多，如 bioMeriux,Tecra,Neogen,Biocontrol, Matrix 等。 分子生物学方法：以基因探针检测法和PCR法(包 括常规PCR方法和荧光PCR方法)为主。 基因芯片：研究热点。 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 微生物显色培养基方法 原理：主要根据微生物能产生特异性的酶，选择 适当的酶底物，使其菌落显现出不同的颜色，与 其它微生物区别开来。 如沙门氏菌具有辛酸酯酶，以4MU-辛酸酯酶为底 物，经沙门氏菌酶解，在紫外灯下观察游离4MU的 荧光，国内已有应用。我们应用β-萘酚辛酯酶为 底物，经沙门氏菌酶解，释出β- 萘酚与固兰作 用出现紫色，反应在纸片上进行，只需5分钟即可 完成沙门氏菌的鉴定。这对食品与环境卫生检验 有重要价值。卡他莫拉菌具有丁酸酯酶，可用丁 酸酯色原底物快速鉴定。大肠埃希氏菌具β-葡萄 糖醛酸酶，但以O157：H7为代表的肠出血性大肠 埃希氏菌（EHEC）却不具此酶，故β-葡萄糖醛酸 酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征。 青岛海博生物 生产500多种微生物培养基 脑膜炎奈瑟菌 γ谷氨酰转肽酶 淋病奈瑟菌 羟脯氨肽酶（Hydroxyprolaminopeptidase） A族链球菌 吡咯芳胺酶（PYR） 肠球菌 PYR、亮氨酸氨肽酶（LAP） 沙门菌 辛酸酯酶 大肠埃希菌 β葡萄糖醛酸酶 卡他莫拉菌 丁酸酯酶 白色念珠菌