4.分子生物学常用技术WXK-3PCR技术4生物芯片.pptVIP

分子生物学常用技术 3.1 凝胶电泳技术 3.2 分子杂交技术 3.3 PCR技术 3.4 生物芯片 3.5 基因文库构建 3.6 DNA序列测定 3.3 PCR 技术 3.3.1 聚合酶链式反应的原理 3.3.2 PCR体系 3.3.3 PCR反应条件优化 3.3.4 PCR类型 以两条互补的DNA为模板，引物是从3`端开始延伸，其5端是固定 的，3`端则没有固定的止点，长短不一，这就是“长产物片段”。 进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链 (即“长产物片段”)结合。引物在与新链结合时，由于新链模板的 5`端序列是固定的， 这就等于这次延伸的片段3`端被固定了止 点， 保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形 成长短一致的“短产物片段”。不难看出“短产物片段”是按指数 倍数增加， 而“长产物片段”则以算术倍数增加， 几乎可以忽略 不计，这使得PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA片 段供分析与检测用。 PCR扩增特异DNA的原理 PCR扩增特异DNA的原理 反应中使用10～50mmol/L Tris.CL，主要靠其调节pH使Taq DNA聚 合酶的作用环境维持偏碱性。在反应体系中加入适量10%的二甲基 亚砜，虽然对聚合酶活性有一定