食品中三种致病菌多重PCR检测体系的建立及其初步应用.pdf

摘要 近年来，全球食品安全恶性事件频发，食品安全问题是影响公共健康的重要因 素，已经成为社会关注的热点。其中，细菌性食物中毒是导致各种食品安全恶性事 件的主要原因。因此，食源性致病微生物的检测是食品卫生安全检测中一个重要的 部分。目前，食源性致病微生物主要采用分离、培养然后生化鉴定的方法，操作繁 琐，检测时间较长，通常需要3．5d才能完成，且每次只能检出一种致病菌，灵敏 度较低。因此，建立快速、高效、准确的食源性致病菌检测方法迫在眉睫。近年来， PCR技术发展十分迅速。多重PCR技术可以实现在一个反应管中同时对多种致病 微生物的检测，具有高效、低成本、高灵敏度等优点。因此，本研究建立了食品中 金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和蜡样芽胞杆菌的多重PCR检测技术。 本文根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nut)、沙门氏菌的侵染上皮细胞表 行多重PCR反应，可实现对三种致病菌的同时检测。试验过程中对反应体系中退 火温度、M92+、dNTPMixture、Taq酶和反应循环数等影响因素进行优化，确定了 最适多重PCR反应体系和循环参数。该反应体系为：2．510×PCRbuffer，2．0 gL