米力农预处理对线粒体钙代谢及酶学影响.pdfVIP

中文摘要 前 言 缺血再灌注损伤(Ischemicreperfusion-IR)是指遭受一定时 间缺血的心肌恢复血液灌流后损伤会进行性加重，甚至发生不可 逆损伤。尽管目前各种心肌停跳液的应用，使心脏手术变得越来 越安全。但对危重病人来说术后心功能衰竭的发生率依然很高， 寻找一种高效可行的心肌保护方法，大幅度减少术后心功能衰竭 研究之重点。 缺血预调(Ischemicpreconditioning-IPC)是由Murry于1986 年首次研究发现的缺血再灌注的反常现象，是指单次或反复短暂 缺血再灌注，并没有对随后长时间严重缺血再灌注产生累积性损 伤，反而产生了对随后缺血再灌注的保护作用。目前其主要评价 指标有:1.心肌梗塞面积;2.左室收缩功能;3.心律失常;4.细胞 完整性酶学指标;5.电镜观察亚细胞结构等。但对结合线粒体功 能及其钙超载的综合研究未有报道。钙离子在细胞生理病理过程 中起着重要的作用，线粒体是细胞内游离钙的重要调节器，在病理 条件下能维持细胞浆内的钙稳态，目前认为缺血再灌注损伤的主 要原因及结果是钙超载，线粒体钙超载可导致其功能障碍，线粒体 亦是细胞的能量工厂，是氧化磷酸化生成ATP的重要场所，细胞 色素氧化酶(CytochromeCoxidase--CCO)是其功能的标志酶，此 酶活性的高低与心肌细胞收缩功能的好坏有着直接的关系。因而 进一步研究IPC的保护作用时，观察线粒体钙超载、测定CCO活 性有助于阐明IPC的机理。 IPC能减轻或延迟IR的发生，故应用于临床是当务之急。 Richard等在手术中应用钳夹阻断主动脉模拟经典缺血方法诱导 IPC，获得了一定的心肌保护作用。但此方法操作较复杂，增加了 ·1· 月 手术的风险性，不适用于临床的广泛使用。药理性预适应是指根 据IPC的机理研究者有目的地以药物替代缺血及其它预处理方法 或激动预调机制中的任意环节来获取与IPC相同或相似的保护作 用。其作用点可以是IPC触发点，亦可以是IPC形成机制中的任 意环节。目前应用于研究的药物很多，如:外源性触发物、血管紧 张素转换酶抑制剂、蛋白激酶C活化剂、ATP敏感性钾通开放剂 等。但并未找到一种简单、易行、可靠的药物预调方法。然而药物 预调仍然以其选择范围广、应用方便、易被接受、无直接损伤等优 越性，而被作为临床研究的重点。 最新研究显示，磷酸二脂酶III抑制剂amnnone预处理能降 低IR时心律失常的发生率，减少梗塞面积，进一步的研究则未见 报道。米力农亦是一种磷酸二脂酶III抑制剂，因其不增加心肌耗 氧量，很少导致快速型心律失常。被广泛用于治疗各种心力衰竭 及心脏手术后的低心排综合症。此类药物IPC保护作用的进一步 研究及其预调机制的确立，将对临床应用起到评价及指导的作用。 本实验利用大鼠离体心脏Langendorff灌注模型，应用冠脉流 量(Coronaryflow-CF)、左室压力变化(leftventriculardeveloped pressure-LVDP)、左室压力变化心率乘积(doubleproduct-DP) 等指标以观察心脏功能;应用Cat细‘胞化学探针一焦锑酸钾 (PPA)原位沉淀细胞内钙，经透射电镜观察心肌亚细胞结构内钙 的分布变化;应用速率法测定线粒体细胞色素氧化酶活性，观察线 粒体功能变化。研究缺血再灌注、缺血预调、米力农预处理对心脏 及线粒体功能变化的影响，对比钙的再分布有何不同。着重研究 米力农对IR的影响，最终确立米力农能否诱导IPC的保护作用， 并进一步评价其IPC作用的强