小亚璃眼蜱的生活史和抗菌多肽活性研究及其牛环形泰勒虫病二温式PCR检测方法的建立.pdf

小亚璃眼蜱的生活史和抗菌多肽活性的研究及牛环形泰勒虫病二 温式PCR检测方法的建立 摘 要 本试验主要研究小亚璃眼蜱生活史和保种试验，在此基础上通过Au．PAGE和电泳凝胶琼脂糖 弥散法，初步分析在小亚璃眼蜱与病原体相互作用过程中，起着重要作用的功能分子抗菌多肽及其 抗菌活性。同时，利用疫区采集的抗凝全血建立牛环形泰勒虫病二温式PCR检测方法，可为综合防 制小亚璃眼蜱及其所传播的牛环形泰勒虫病提供重要科学依据。 anatolicum 小亚璃眼蜱(Hyalommaanatolicum)为一种三宿主蜱，在中国主要分布于新疆维吾 造成重大经济损失。鉴于此，本试验在实验室条件下对小亚璃眼蜱的各个发育阶段的生活史进行了 研究。经观察：小亚璃眼蜱在22．28℃，60．85％相对湿度下室内人工饲养，完成一代需要138d，成 吸血前期、吸血期、蜕化期分别为3d、5．5d、18．5d；若虫吸血前期、吸血期、蜕化期分别为4d、10d、 19d；成蜱在4℃冰箱、室外模拟鼠洞保种试验成活率为80％。本试验表明，小亚璃眼蜱完全可以在 实验室条件下大量繁殖和4℃冰箱保存，这可给蜱及蜱传疾病研究提供丰富、低廉的试验材料，且 其各个发育阶段的生物学参数能为研究蜱及蜱传播疾病的综合防制提供依据。 本文利用上述试验繁殖和保种的小亚璃眼蜱，对其血淋巴中阳离子抗菌多肽的电泳分析方法及 其抗菌作用进行探讨，从半饱血的小亚璃眼雌蜱体内抽取血淋巴，用50ml／L的乙酸抽提，经 AU．PAGE分析小亚璃眼蜱血淋巴中阳离子多肽成份，用电泳凝胶琼脂糖弥散法对各多肽进行抗菌 活性的筛选。结果表明，小亚璃眼蜱血淋巴中阳离子多肽成份对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有很 强的抗菌作用。AU分析发现一电泳迁徙率明显高于溶菌酶的阳离子抗菌多肽。提示在小亚 璃眼蜱的血淋巴中，存在与溶菌酶不同的阳离子抗菌多肽。Au．PAGE是一种较简单，快速，经济 的分离纯化天然抗菌多肽的方法。 在疫区采集牛体上硬蜱的同时无菌采取了该牛的全血，用于建立牛环形泰勒虫病二温式PCR检 测方法，根据牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原(Tamsl)基因，设计了一对特异性引物，扩增出大小 为154bp基因片段，经克隆、测序分析，与已知基因序列的相似性为96％。用建立的牛环形泰勒虫 病二温式PCR检测方法，对新疆牛环形泰勒虫病流行地区采集的50份全血样品进行检测，阳性率 为88％，而血涂片检出的阳性率只有58％。经试验验证，该方法具有特异性高、敏感性强、重复性 和稳定性好等优点。表明，本试验所建立的二温式PCR检测方法可用于牛环形泰勒虫病的临床诊断、 隐性感染和流行病学调查。 关键词：小亚璃眼蜱；生活史：抗菌多肽活性；牛环形泰勒虫病：二温式PCR I onLife and ofAntibacterial Study CycleActivity PeptidesofHyalomma anatolicumanatolicumand A of PCRMethod DevelopmentTwo—temperature for TheileriaannulataInfectioninCattle Detecting Abstraet Inthis was life of anatolicumanatolicuminunder study，1completedcycleHyalomma theconditionsofthe afterisolationantibacterial laboratory，and of from peptideshemoly