四重组DNA技术.pptVIP

第四节 重组DNA技术 目 录 一、目的基因的克隆 二、重组体的筛选 三、DNA的人工合成和扩增 四、基因的定位诱变 一、目的基因的克隆 DAN克隆，又称重组DNA，是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质——同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的DNA，与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DAN分子。 实现DNA克隆所采用的方法及相关的工作统称重组DNA技术，又称基因工程。 一个完整的DNA克隆过程包括： 目的基因的分离 载体的选择与酶切 目的基因与载体的连接 通过转化或转染将重组DNA分子导入受体细胞 筛选转化子或转染子并鉴定携有特定DNA片段的转化子 一、目的基因的克隆 （一）目的基因的分离 从组织或细胞中分离染色体DNA，利用限制性核酸内切酶（如BamHI,EcoRI）将染色体DNA切割成许多片段，其中即含有我们感兴趣的基因片段。 限制性核酸内切酶能识别双链DNA上4~6个核苷酸序列，并切开两条单链上的磷酸二酯键。 如果在识别位点进行不对称切割，则酶解后的DNA具有互补的、单链突出末端，即粘性末端；如果对称切割则产生平端的片段。 （二）载体的选择 外源DNA片段离开染色体是不能复制的。如果将外源D