药品微生物控制菌检查及其菌种鉴定基因分型方法研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要．……………………………………………………………………4 研究论文药品微生物控制菌检查及菌种鉴定／基因分型方法的研究 前言………………………………………………………………8 日IJ吾………………………………………………………………芍 材料与方法……………………………………………………………9 结果………………………………………………………………14 附图………………………………………………………………22 附表………………………………………………………………47 结论………………………………………………………………50 1 参考文献………………………………………………………………5 综述 药品铜绿假单胞菌检查及分型方法的研究进展………………．．52 致{射………………………………………．．………………………………．64 个人简历……………………………………………………………………65 万方数据 中文摘要 药品微生物控制菌检查及菌种鉴定／基因分型方法的研究 摘 要 在科学技术日新月异的今天，随着分子生物学和微电子技术的飞速发 展，快速、准确、特异检验的微生物新技术、新方法不断涌现，微生物检 验技术由培养水平向分子水平迈进，并向仪器化、自动化、标准化方向发 展，提高了微生物检验工作的高效性、准确性和可靠性。但是在药品检验 领域，微生物鉴定技术甚少。菌株随着环境的变迁不断发生着遗传变异， 许多控制菌株在按照标准检验时，周期长，有时出现假阴性。目前，中国 药典逐渐与欧洲药典、美国药典和日本药局方协调一致，在控制菌鉴定方 面也做出了“适宜的鉴定方法确证的要求。因此，获得适宜的控制菌检查 和鉴定技术是检验结果高效、准确和可靠的基本保证。 铜绿假单胞菌，是临床常见重要条件致病菌之一，也是药典收载的局 部用药的重要控制菌，有较高的死亡率。其易定植、易变异和多耐药，广 泛存在于土壤、水、空气及人体皮肤、呼吸道与肠道。目前，该菌是药品、 化妆品以及实验动物检验中一项重要的微生物控制指标。 对于正常样品来讲，一般需经过灭菌处理，残存菌株都或多或少受过 不同程度的损伤，要通过某些培养基复苏到能够被检出的程度，势必需要 满足灵敏度高、起始增菌时间短、增菌浓度高的要求。虽然药典明确提出 了培养基适用性检查的必要，但是来源不同的培养基，即使满足了中国药 典或其它标准的基本要求，其灵敏度也有一定差异。 由于检测仪器的限制，要获得较多的实验数据，检验工作极其繁琐， 是该类微生物实验进行的一个瓶颈问题。传统鉴别方法日益暴露出种种弊 端，越来越不适应消费者快餐式的现代消费理念。在追求快速、简便检测 的同时，更希望结果的准确性。本课题以铜绿假单胞茵为典型代表，选择 不同来源的9株阳性菌株和国内外16种培养基利用酶标仪在线检测OD 值绘制生长曲线的方式，重点探索最适宜的液体增菌培养基和培养条件， 大大减少了工作量，走在了增菌培养基筛选技术的前沿。同时对上述9 株阳性菌株生化鉴定及分型方法做了进一步的探索实验。 目的：采用择优录取的方式，在一定培养条件下，评选出优质、高灵 万方数据 中文摘要 敏度的液体增菌培养基；采用传统鉴定方法、国际金标准鉴定技术、荧光 检测和基因分型，从而在最直接、最经济的鉴定与基因分型方法检验过程 中发现隐含的漏检因素，为药品、化妆品以及实验动物检验提供参考。 方法：液体增菌培养基和培养条件的筛选，通过对生长曲线图中关键 参数和绿脓菌素的浓度、菌膜生长情况对比情况，择优录取。将新鲜菌株 2 进行传统方法鉴定、API