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DNA修复抑制剂在彗星试验中的应用研究 DNA修复抑制剂在彗星试验中的应用研究 研究生:鹿伟 导 师:衡正昌教授 摘 要 彗星试验研究和测定的是单个细胞DNA链断裂。在细胞DNA修复过 程中断裂状态持续时间较短。运用DNA修复抑制剂可能使该试验对DNA 加合物、修复较快的断裂等损伤形式的检测敏感性以及试验结果的重现 性、稳定性得到进一步提高。 本研究在彗星试验中首次使用 24孔板来培养和染毒细胞，联合运用 轻基N、阿搪胞昔、2,3一双‘脱氧胸有三磷酸三种DNA修复抑制剂，探索 三种抑制剂联合运用的合理浓度，研究抑制剂在此浓度下对V79细胞、小 鼠肝原代细胞彗星试验的影响。同时，进一步研究阿糖胞普和2,3-双脱氧 胸昔三磷酸对不同类型DNA损伤修复的阻滞效应。 使用24孔板培养和染毒细胞，染毒前每孔细胞计数约为IX105-2X 105，试验结果细胞分布均匀，密度适中。采用正交试验设计方法，结果显 示:联合运用经基R 1mo/lL、阿糖胞昔 。5mmol/L,2,3一双脱氧胸普三 磷酸20}imol/L或轻基脉2mmol/I、阿糖胞营0.1mmol/L.2,3’一双脱氧胸 营三磷酸20pmol几，抑制剂木身不会造成细胞DNA损伤，但能使 0.01 mmol/L重铬酸钾诱发的V79细胞彗星试验尾长显著增加。在此浓度下联 合运用三种抑制剂均显著提高了V79细胞彗星试验和小鼠肝细胞彗星试 验对饮水有机提取物、重铬酸钾、苯并(a)$E、联苯服的敏感性。同时，理 论上运用DNA修复抑制剂对彗星试验重现性和稳定性的改善也会发挥一 定的作用。 DNA修复抑制剂在斗星试验中的应Jfll}Jfl} 用已知具有遗传毒性的化合物造成细胞DNA链断裂和大分子DNA加 合物，在DNA修复过程中分别加入阿糖胞葺和2,3一双‘脱氧胸有三磷酸， 结果显示:阿糖胞昔完全阻止了大分子DNA加合物的修复，2,3一双‘脱氧 胸营三磷酸无此效应;阿糖胞昔、2,3一双‘脱氧胸着三磷酸均不同程度地阻 滞了DNA链断裂的修复，而阿糖胞昔作用更为显著。对于未知受试物， 通过观察两种聚合酶抑制剂对其诱发的DNA损伤修复的阻滞效应，可以 了解该物质对细胞DNA的损伤类型，即:修复过程能被阿糖胞营明显阻 滞而不能被2,3一双‘脱氧胸昔三磷酸阻滞的损伤多为大分子DNA加合物; 修复过程均能被阿糖胞普、2,3，一双脱氧胸昔三磷酸阻滞或仅能被2,3一双‘脱 氧胸昔三磷酸阻滞的损伤为DNA单链断裂或小分子DNA加合物。 通过本研究，建立了一种联合运用轻基脉、阿糖胞普、2,3’一双脱氧胸 营三磷酸的24孔板彗星试验，该试验简便、快速、敏感性高、所需样品 量少、适合大样本检测，有利于试验稳定性的提高。同时，通过观察阿搪 胞昔和2,3一双‘脱氧胸昔三磷酸对未知受试物诱发的DNA损伤修复的阻滞 效应，可以了解该物质对细胞DNA的损伤类型。 关键词:彗星试验 敏感性 DNA修复 羚基服 阿糖胞昔 2,3’一双脱氧胸普三磷酸 DNA修复抑制剂在彗星试验中的应用研究 EffectsofDNArepairinhibitorsoncometassay Postgraduate:切 Wei Tutor:ProfessorHengZhengchang Abstract CometassaydetectsDNAsingle-strandbreaksofsinglecell.Becausethe timethatbreakslastsisveryshortduringDNArepairprocess,ifweaddDNA repairinhibitorsintheassay,thesensitivityandrepetitionmaybeenhanced. Theresearchfirstlyuses24-wellplasticculturedishesincometassay, applies hyd