不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下能否进入活的但非可培养状态及形态随时间的改变.pdf

ISlIIJl IftllllltllFInlPllllJlJlllllIIIPllJ 目 录 中文摘要……………………………………………………………………．1 英文摘要…………………………………………………………………………．4 研究论文 不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下能否进入活的但非 可培养状态及其形态随时间的改变 前言…………………………………………………………………………．．8再Ij舌……………………………………………………………………………………………．8 材料与方法…………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………………．．13 附图………………………………………………………………………15 讨{仑……………………………………………………………………………………………21 结论……………………………………………………………………………………25 参考文献………………………………………………………………．．25 综述 活的但非可培养(VBNC)状态细菌的研究进展………………32 致谢……………………………………………………………………………………43 个人简历………………………………………………………………………44 中 文摘 要 不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下 能否进入活的但非可培养状态及其形态随时间的改变 摘 要 目的：1本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下在35 天的观察期内能否进入活的但非可培养状态。 2观察本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下 在35天的观察期内其革兰染色形态随时间的变化。 方法：1空肠弯曲菌菌株的复苏和传代：取自神经病学实验室(河北 医科大学第二医院)-80。C冰箱中保存的格林一巴利综合征患者分离培养出 1 株和非GBS源的NCTCl168株，待冻存的菌株自然消融后，接种于哥伦比 8596N2)条件的三气培养箱中，所有菌株培养24小时对应的P．代菌株回收， 取P，代菌落三区划线接种于含7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板上， 小时获得各菌株相应的P。代菌株，取P。代菌落三区划线接种法接种于含 7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基上，置于三气培养箱，42℃微 代菌株。 2鉴定空肠弯曲菌：革兰染色法显示菌株为革兰阴性杆状菌， 马尿酸水解试验结果显示为阳性。 3收菌用无菌接种环分别刮取4株空肠弯曲菌少量P。代细菌 于盛有3ml 摇匀制成菌悬液，每株菌株做4个备份菌悬液并做好记号，所有的菌悬液 cfu／ml。 浓度用细菌浊度仪定量在3,105 4饥饿状态：将上述盛有菌悬液的无菌西林瓶置于4。C冰箱内， 不需要振荡。 5分别在菌悬液置于冰箱内的第0天，第5天，第10天…… 中 文摘要 计数可培养细菌数。分别对每株空肠弯曲菌的一个备份同时计数总细菌 数，活细菌数及可培养细菌数。 6平板直接计数法用无菌双蒸水连续稀释的菌悬液样本 (O．Iml)一式三份接种到含7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基 稀释度下的CFUs，并可以计数原来起初的样本中的CFUs。当可培养细胞 养皿上。 7CTC-DAPI双染法在相应的时间点，取出来自空肠弯曲菌悬 et 浮液中的样本并根据Cappelier u 色细胞。为了激发细胞呼吸，0．5ml脑心浸液和100 l的0．059／mL丙酮 酸溶液加入到要进行分析的0．5ml菌悬液中。CTC用双蒸水稀释到最终浓 u