生物样品中酪氨酸及代谢产物分析新技术的研究及应用.pdfVIP

摘要 摘要 酪氨酸是人体重要的半必需氨基酸，酪氨酸血症、尿黑酸症等氨基酸代谢 疾病、肝肾疾病、神经系统变性性疾病、恶性肿瘤等均可导致酪氨酸代谢异常， 从而引起体液中酪氨酸及其代谢产物含量的变化。因此，研究建立简便、快速、 灵敏的分析方法并应用于人体体液中酪氨酸及其代谢产物含量的分析，对于某 些疾病的辅助诊断、治疗和监测具有十分重要的临床意义。然而，在酪氨酸及 其代谢产物的研究中，以酪氨酸的研究较为深入，现已成功应用于临床上氨基 酸疾病的筛查，而对酪氨酸代谢产物的研究相对较少。在已有的测定酪氨酸及 其代谢产物的方法中，同时测定酪氨酸及其一种或两种代谢产物的报道较多， 而同时测定多种代谢产物的报道较少。基于此，本研究在国内外酪氨酸及其代 谢产物分析方法的基础上，研究建立了生物样品中酪氨酸及其代谢产物分析新 方法，取得了较为满意的结果。其研究成果如下： nm，采集 1．在pH=6．00的KH2P04-NaOH缓冲溶液中，设置波长差Ak=35 260～325 nln波长范围内的同步荧光光谱数据，并对该数据进行一阶求导后用偏 最小二乘法处理，以此建立了偏最小二乘．导数同步荧光光谱法同时测定对羟苯 基乳酸、多巴和尿黑酸的新方法。三种物质的线性范围分别为O．06～3．00 mg／L， O．06～3．00 mg／L，0．03mg／L和0．04 mg／L和0．08～3．00mg／L；检出限分别为O．03 mg／L。此法用于细胞培养液中三组分的同时测定，结果令人满意，且其测定结 果与高效液相色谱法的测定结果相比无显著性差异。 2．利用酪氨酸及其代谢产物具有自体荧光的特性，建立了超高效液相色谱 ．荧光检测法测定人体血清中酪氨酸及其代谢产物的分析方法。血清经高氯酸 SB．C18 (5％，v～)沉淀蛋白，高速离心取上清液后，过膜测定。采用ZORBAX 快速分离柱，以甲酸铵．甲酸缓冲溶液(pH=5．8)：乙腈=95：5Ⅳ：V)为流动相，调 16 0 n／11，kem=3nln，待测物在1 节流速为0．20mL／min，荧光检测波长为kx=277 min内完成分离，且效果良好。结果显示，多巴的线性范围为0．032-2．00 mg／L， 酪氨酸的线性范围为0．16～20．00mg／L，对羟苯基乳酸、对羟苯基乙酸、酪胺和 对羟苯基丙酸的线性范围为0．016-2．00 mg／L；六种待测物的检出限在 0．016～0．032 mg／L之间；定量限在O．040～0．080mg／L之间；线性相关系数在 0．9996～1．0000之间，线性关系较好。健康人和癌症病人血清中六种待测物在三 摘要 个不同加标水平下的平均回收率分别在86．5％102．5％和88．3％～107．3％之间， 相对标准偏差分别在O．3％～5．7％禾tJO．5％,-4．3％之间。以上结果表明，该方法准 确可靠，可用于实际样品的测定。将所建立的方法应用于健康人、乳腺癌病人 和肝癌病人血清中酪氨酸及其代谢产物的分析，结果显示，癌症患者和健康人 血清中酪氨酸及其部分代谢产物的含量有一定差异，且不同癌症患者血清中酪 氨酸及其部分代谢产物的含量也有所不同。本研究为今后深入研究酪氨酸及其 代谢产物和某些癌症的关联性打下了一定的基础。 3．采用固相萃取技术，结合超高效液相色谱．荧光分析手段，建立了人体尿 液中酪氨酸、对羟苯基乳酸和对羟苯基乙酸同时测定新方法。系统探讨了不同