《Livin shRNA真核表达载体构建及其对HepG2细胞化疗敏感性的影响.》.pdf

5I卷 第 l2期 LLI 东 大 学 学 报 (医 学 版) 2013 12J]1 VO1．51 NO．12 JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Dec．2Ol3 文章编号：1671—7554(2013)12—0020—05 DOI：10．6040／j．issn．1671-7554．0．2013．011 LivinshRNA真核表达载体构建及其 对 HepG2细胞化疗敏感性的影响 徐威，常宏，翟云鹏 (山东大学附属省立医院普外科 ，济南250021) 摘要：目的 构建针对 Livin基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体，探讨其对肝肿瘤HepG2细胞化疗敏感性 的影响。方法 设计并构建针对Livin基因的shRNA真核表达载体 pSD11一u6／Neo／GFP／Livin，脂质体法转染肝 肿瘤HepG2细胞。荧光定量PCR、Westernblotting检测细胞LivinmRNA和蛋白的相对表达水平。顺铂(2．0mg／L) 处理后 ，MTT法检测细胞生长抑制率。结果 测序分析证实针对Livin基因的shRNA真核表达载体构建成功 ，转 染肝肿瘤HepG2细胞后可降低 LivinmRNA和蛋 白的相对表达量 (P0．05)，顺铂对转染Livin表达载体的 HepG2细胞抑制率明显高于未转染细胞 (P0．05)。结论 成功构建 LivinshRNA真核表达载体，且有效抑制 HepG2细胞中Livin基因的表达，增强肝肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。 关键词 ：Livin基 因；RNA干扰 ；肝细胞肝肿瘤 中图分类号：R735．7 文献标志码：A ConstructionofLivin shRNA eukaryoticexpressionvectorand itsinfluenceonchemotherapeuticsensitivityofHepG2cells XU W ei，CHANG Hong，ZHAIYun·peng (DepartmentofGeneralSurgery，ShandongProvincialHospitalAffiliatedtoShandongUniversity，Jinan250021，China) Abstract：Objective ToconstructashorthairpinRNA (shRNA)eukaryoticexpressionvectortargetingtotheLivin gene，andexploreitsinfluenceonchemotherapeuticsensitivityofHepG2cells．M ethods TheLivinshRNA eukaryotic expressionvectorspSDI1一U6／Neo／GFP／livinweredesigned，constructednadtransfectedstablyintoHepG2cells．Th e LivinmRNA nadproteinrelativeexpressionweredetectedbyfluorescencequantitativePCRnadW esternblotting MTT ． wasusedtoevaluatetheinhibitionrateofHepG2cellsafterexposuretocisplatin(2．0mg／L)．Results