生物技术制药课件第一二章.ppt

（三）导入途径 导入途径有：转化、转染、感染，还可采用电融合、显微注射和基因枪等技术。 这些途径将随载体种类和受体系统的不同而异。 1、转化：将携带目的基因的重组质粒导入受体细胞的过程称为转化。 2、转染：将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞的过程称为转染。 3、感染：将重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的噬菌体颗粒，再导入受体细胞的过程。 （四）重组质粒DNA导入大肠杆菌细胞的转化 重组质粒DNA转化到大肠杆菌细胞中的效率与其“感受态”有关。 感受态就是细菌吸收转化因子（重组质粒DNA）的生理状态； 有两种途径可以得到大肠杆菌感受态细胞： 1、一是直接向供应商购买冻存的感受态细胞，这些产品非常可靠但价格昂贵。 2、二是在实验室自行制备感受态细胞。 （1）用氯化钙制备新鲜感受态细胞及重组质粒DNA的转化 该法适用于大多数大肠杆菌菌株，具有简单快速、重复性好的优点。 制备方法：将大肠杆菌某受体菌株的单菌落接种于液体培养基，经振荡培养后，在低温（冰浴）下离心洗涤，加入冰预冷的0.1Mol/L CaCl2溶液重悬细胞，进行感受态处理。 转化过程：处于低温下的感受态细胞CaCl2悬浮液，加入微量（10μl）的重组质粒DNA，轻轻混匀后，置冰浴中30min，再放入42℃水浴中静置1.5min，立即移至冰浴中冷却1~2min。 最后，转化的细胞进行复苏培养和选择性培养，在平板上