生物分析化学样品处理.pptVIP

第三讲 生物样品的处理 生物样品处理的主要问题 组成复杂，易变 样品量有限 分离纯化的步骤繁多 浓度变化范围宽 生物分子易失活 难评估 生物样品预处理的基本原则 步骤少、时间短，获得尽可能多的目标组分 通常包括以下考虑因素： 确定要处理的生物分子的目的和要求 掌握目标产物的物理、化学以及生物学性质 生物材料的破碎和预处理 分离纯化方案的选择和探索 评价生物分子纯度的检验方法 产物的浓缩、干燥和保存。 物理、化学及生物学性质的考虑 水溶液和各种有机溶剂中的溶解性 不同温度、pH值和各种缓冲液中的稳定性 对温度、含水量和冻干时的稳定性 分子的大小、带电的情况、离心沉降的表现、在各种凝胶、树脂等填料中的扩散系数等 对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性等 对其他生物分子的特殊亲和力 组织及细胞内的定位分布等。 真核细胞的亚细胞器 细胞破碎的目的 使被分离的分子充分地释放到溶剂中，与细胞中其它化合物和生物大分子分离，并由固相转入液相，并尽可能保持原有的生物活性。 将目标分子从细胞内的生理状况转入外界特定的溶液中的过程。 水溶液提取 稀盐和缓冲溶液对蛋白质等生物大分子的稳定性好、溶解度大。考虑的影响因素如下： 盐浓度（即离子强度）：在低离子强度的溶液中绝大多数蛋白质和酶都有较大的溶解度，此为“盐溶”现象；中性盐的浓度增加至一定时，蛋白质的溶