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复习回顾 1、蛋白质的基本结构单位?元素组成? 2、蛋白质结构多样的原因? 3、蛋白质有哪些功能? 4、蛋白质如何合成?涉及哪些细胞器? 蛋白质工程的应用----胰岛素改造 蛋白质工程的应用----人工合成改造抗体 一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。蛋白质的二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。蛋白质的三级结构是整个多肽链的三维构象,它是在二级结构的基础上,多肽链进一步折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。蛋白质的四级结构指数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键相互连接而成的聚合体结构。 蛋白质工程 (1)基因工程的实质:将一种生物的 转移到另一种生物体内,使后者产生本不能产生的 ,进而表现出新的 。 (2)基因工程的不足:在原则上只能利用自然界原有的 生产自然界已存在的 。 知识回忆 基因 蛋白质 性状 蛋白质 基因 天然蛋白质是生物在长期 过程中形成的,它们的 符合特定物种 的需要,是否一定完全符合人类生产和生活的需要。 进化 结构和功能 生存 干扰素在体外保存困难且抗病毒活性低 半胱氨酸 丝氨酸 变成 天然蛋白质的不足 解决方法: 例如,干扰素是动物体内的一种蛋白质,可以用于治疗病毒的感染和癌症,但在体外保存相当困难。如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸,则在 -70℃ 可保存半年。 玉米中赖氨酸含量比较低,原因是赖氨酸浓度达到一定时会抑制赖氨酸合成过程中的两个关键酶——天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的活性,所以赖氨酸含量很难提高。如果将天冬氨酸激酶的第 352 位的苏氨酸变成异亮氨酸,将二氢吡啶二羧酸合成酶中 104 位的天冬氨酰变成异亮氨酸,可使玉米叶片和种子中游离的赖氨酸含量分别提高 5 倍和 2 倍。 转录 DNA RNA 翻译 肽链 折叠等 具一定有空间结构的蛋白质 表达生物特有的功能或性状 天然蛋白质的合成过程 遵循中心法则,并需经过高级空间结构的转变 为获得完全符合人类生产和生活需要的蛋白质,能否对原在蛋白质进行改造?为什么?怎么办? 思考:对天然蛋白质进行改造,你认为应该直接对蛋白质分子进行操作,还是通过对基因的操作来实现? 应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造,主要原因如下: (1)任何一种天然蛋白质都是由基因编码的,改造了基因即对蛋白质进行了改造,而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造,即使改造成功,被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。 (2)对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作,难度要小得多。 蛋白质工程的概念 前提: 原理: 目的: 了解蛋白质的结构和功能 改造基因(基因修饰或基因合成) 定向改造或制造蛋白质 蛋白质工程的实质: 在基因水平上定向的改造或创造新的蛋白质 蛋白质 三维结构 氨基酸序 列多肽链 基因 DNA 预期功能 DNA合成 分子设计 mRNA 生物功能 转录 翻译 折叠 蛋白质工程流程图 问题思考: 氨基酸排列顺序的测定? 用什么方法可以获得蛋白质的空间结构? A)X射线晶体衍射法 B)核磁共振法 蛋白质测序技术 血红蛋白的结构 基因的定点诱变技术(是改变蛋白质结构的核心技术之一) 氨基酸序列 预期功能 自主学习: 根据蛋白质被改造部位的多少,可以将对蛋白质的改造分成 在蛋白质分子中_______某一个肽段或一个特定的结构域。 目的: 途径: 方法: 小改: 中改: 大改: 设计并制造出自然界中不存在的全新蛋白质,使之具有特定的______________、空间结构和_____________。 替代 改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基 改善蛋白质的性质和功能。 蛋白质工程的主要步骤通常包括: (7)分离、纯化新蛋白,功能检测后投入实际使用。 (4)设计各种处理条件(了解蛋白质的结构变化,包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响) (5)设计编码该蛋白的基因改造方案,(如定点突变) (2)了解蛋白质的空间结构; (1)从生物体中提取目的蛋白质; (3)测定其氨基酸序列; (6)进行相关的操作(基因工程) 过程 结果 联系 目标 操作核心 操作起点 蛋白质工程 基因工程 项目 目的基因 预期的蛋白质功能 基因表达载体 基因 获取目的基因→ 制备重组DNA分子→ 转化受体细胞→ 筛选重组细胞→ 实现功能表达 预期蛋白质功能→ 设计蛋白质结构→ 推测氨基酸序列→ 推测核苷酸序列→ 合

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