人前列腺癌细胞表达B7-H3的临床意义及生物学作用机制.pdfVIP

人前列腺痛细胞表达B7-H3的临床意义及其生物学作用机制 中文摘要 人前列腺癌细胞表达B7-H3的临床意义及其 生物学作用机制 中文摘要 cancer，PCa)是男性最常见的泌尿系肿瘤之一。目前主要的 前列腺癌(prostate 治疗方法有：根治性手术治疗、放射治疗及内分泌治疗等。早期临床局限性前列腺癌 通过根治性手术或放射治疗可以治愈，而中晚期进展性前列腺癌目前主要以内分泌治 疗为主。接受内分泌治疗的患者，大多数起初有效，但几乎都将逐渐发展为激素非依 赖性前列腺癌或激素难治性前列腺癌，预后不佳。因此，揭示前列腺癌进展中的分子 机制已成为国内外研究的热点。B7-H3是近年来发现的一个共刺激分子B7家族新成 员，研究表明其在前列腺癌组织中异常高表达，并且与肿瘤的临床病理特征之间存在 显著负相关性。但B7--H3在前列腺癌进展中的作用机制仍不清楚。 本研究首先检测并分析了B7-H3在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达情况。 体外沉默B7-H3基因，研究该分子对前列腺癌细胞株PC-3细胞生物学行为的影响及 可能机制。 本研究分三个部分： 第一部分前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3分子的表达 目的：检测前列腺癌及前列腺增生组织中B7m3分子的表达水平。 方法：分别收集13例前列腺癌及19例前列腺增生组织标本，运用免疫组织化 immunosorbent assay，ELISA)进行检测，并进行统计学分析。 结果：免疫组织化学染色结果显示，前列腺癌组织中的B7--H3表达水平显著高 性细胞数大于50％。4例前列腺癌以及5例前列腺增生组织切片B7-H3染色阳性细胞 中文摘要 人前列腺癌细胞表达B7413的临床意义及j￡生物学作用机制 数小于25％。ELISA检测结果显示，前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3分子水平 结论：B7-H3蛋白在前列腺癌组织中的表达显著高于前列腺增生组织，并首次 定量分析了B7-H3蛋白在前列腺癌组织中的表达水平，得出了具体的参考值。 关键词：B7-H3；前列腺癌；前列腺增生；ELISA；免疫组化 第二部分靶向人B7-H3基因有效siRNA序列的筛选及效果检测 目的：设计、合成靶向B7-H3基因的siRNA序列，并筛选出最有效的序列，为 后续研究提供依据。 对照序列。转染后6小时荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测转染效率。转染后24 小时逆转录PCR(reverse mRNA 表达水平，筛选出有效序列。实时定量PCR(Real-timePCR)及流式细胞仪(flow 细胞B7-H3 mRNA及蛋白表达的抑制效率。 结果： 转染后6小时，转染效率超过80％。B7书3_4siRNA在转染后72小时 内能有效抑制B7-H3mRNA表达及蛋白表达，抑制率达60％。 结论：筛选到一条干扰效果较佳的B7-H3siRNA干扰序列，为进一步研究B7-H3 生物学功能奠定了基础。 关键词：siRNA；B7-H3；筛选；PC-3细胞 第三部分： B7-H3膜分子对人前列腺癌细胞株PC-3生物学行为的影响 目的：利用B7-H3-4 细胞生物学行为的影响。 siRNA 方法：实验分为三组：空白对照组B(不转染组)；阴性对照组NC(NC 组)；实验组(B7m3_4siRNA组)。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞生长率，绘 制生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期；ArmexinV／PI双染色法测量细胞凋亡率；基 Ⅱ 人前列腺痛细胞表达B7-H3的临床意义及je生物学作用机制 中文摘要 质期胞粘附实验检测细胞粘附能力；划痕实验检测细胞水平迁移能力；Transwell侵 袭实验检测细胞侵袭力。对所有数据进行统计学分析。 照组、阴性对照组OD值稍高