三种豆科牧草的原生质体的培养及其骆驼刺和鹰嘴紫云英的体细胞杂交.pdfVIP

第一部分三种豆科牧草的原生质体培养 摘要 以草木樨状黄芪发根农杆菌凡转化系再生植株幼叶为材料，通过酶法分离 出大量有活力的原生质体。原生质体经持续分裂形成愈伤组织，并高频率分化出 再生苗。比较了不同叶龄、预处理时间、不同酶解时间和培养密度及不同激素组 x 合对原生质体分裂和再生的影响。结果表明，原生质体以3 105个／ml的植板密 M甘露醇， 度，采用液体浅层培养在附加有2．0mg／L2，4．D，0．2mg／L6BA，03 mg／L水解酪蛋白的DPD培养基中，可获得最佳培养效果， 2％(w／v)蔗糖和500 其细胞分裂频率达38％左右。由原生质体获得的愈伤组织可再生植株。 对骆驼刺发根农杆菌～转化系愈伤组织分离的原生质体进行了培养，并获 得了愈伤组织和分化的幼苗。结果表明，新转代8d的黄色颗粒状愈伤组织，为 获得大量有活力(80％)的原生质体的最佳状态。渗透压为540士3mmol／L时， 可达41．7％。由原生质体获得的愈伤组织有再生植株的能力。 用甲硫氨酸抗性系鹰嘴紫云英的愈伤组织分离原生质体，发现该愈伤组织在 转代12d时，游离的原生质体活力最高。原生质体以2X105个／ml的植板密度， 培养于附加有2．0mgm 2,4-D，0．2mg／L6BA，，0．3 M甘露醇，2％(w／v)蔗糖和 500mg／L水解酪蛋白的DPD培养基中，分裂频率可达到38％。原生质体形成的 愈伤组织在附加有高浓度KT的MS基本培养基上，可诱导出丛生芽。 关键词：草木樨状黄芪骆驼刺鹰嘴紫云英发根农杆菌A4转化系 甲硫氨酸抗性系原生质体培养植株再生 第二部分骆驼刺和鹰嘴紫云英的体细胞杂交 摘要 在原生质体培养再生植株成功的基础上，采用电融合法诱导体细胞杂交，首 次得到骆驼刺(+)鹰嘴紫云英的属间体细胞杂种。探讨了原生质体浓度和交流电 场对细胞队列的影响，在原生质体混合密度为3X105个／mL的条件下，优化了 AC(交流电压)、DC(直流电压)电场强度和融合次数等电融合参数，并建立了 骆驼刺属和鹰嘴豆属间杂交细胞筛选体系。结果表明：当AC为125V／cm，DC 为1．35Kv／cm，融合次数为2时，可获得24％的融合频率。通过生理互补法筛选 得到25块单克隆愈伤组织。已有5个克隆出现分化。 关键词：骆驼刺 鹰嘴紫云英 体细胞杂交 电融合 11 Somatic between hybridizafionAlhagipseudal cicerL． hagi．andAstragalus Abstract Onthebasisofsuccessful culture，somatic between protoplast hybridization Ad—transformed andmethionine Agrobacteriumrhizogene Alhagipseudalhagi resistantcelllineof cicer carried L．were out of Astragalus electrofusion