第八章亲和纯化技术.pptVIP

亲和纯化 * 外源凝集素亲和电泳 利用外源凝集素对目标蛋白质的特异性作用进行亲和电泳。 适用于分析血清糖蛋白。 * 毛细管亲和电泳 将亲和技术应用于毛细管电泳——毛细管亲和电泳。 原理：根据底物、配基、与底物-配基复合物的迁移时间不同，采用毛细管区带电泳测定Kd或Kb。 用于手性药物及DNA片段的特异性分离。 * * （四）、载体孔径的影响 载体孔隙是配体向配基接近的通道。 孔径大小对吸附剂亲和能力有影响。 （五）、微环境的影响 载体及“手臂”的电性、极性对亲和力的影响。 避免引入离子键的基团。 疏水作用的存在，会引起非特异性吸附作用。 * 六、 配基与间隔臂的连接 （一）、含氮配基的连接 （二）、含羧基配基的连接 （三）、含巯基配基的连接 （四）、含醛基、酮基、羟基配基的连接 * 七、 亲和层析的吸附和洗脱 影响吸附的条件 亲和层析的洗脱 亲和吸附剂的再生 * （一）、影响吸附的条件 亲和吸附剂及配体的性质 缓冲液的种类、离子强度、pH、温度和层析流速有关。 温度升高会使吸附作用减弱。 流速每小时低于10 ml/cm2。 层析柱用前必须充分平衡。 上样体积为柱床体积的5%。 * 非专一性吸附 亲和层析中的非专一性吸附。 离子效应 疏水基团 复合亲和力 *