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基因打靶技术也具有广阔的应用前景，如基因治疗，动植物新品种（新品质）的产生等。通过基因打靶技术，去除牛奶中的特殊成分或水果及谷物中特殊的酶类，从而改良食品的品质。基因打靶技术是在小鼠生产人源单克隆抗体的最有前途的方法。首先利用基因打靶技术将小鼠免疫球蛋白的重链和轻链编码基因剔除，同时建立人免疫球蛋白基因转基因小鼠。将两种小鼠进行交配，就可能产生出生产人抗体的工程小鼠。 第七节 基因操作在医学发展中的意义 分子生物学是带动生命科学的前沿学科，也是医学向分子水平发展的先导。作为分子生物学中最重要，最有实用价值的多种基因操作技术，已经对于基础医学、临床医学、药学和法医学等带来了革命性的变化。基因操作技术在医学方面的价值主要包括：（1） 提供多种发现疾病相关基因和认识疾病的分子机制的新策略；（2） 高效率、低成本生产人类疾病治疗和预防用的生物活性蛋白质；（3） 建立新的疾病诊断方法—基因诊断方法；（4）纠正人类基因缺陷的方法—基因治疗；（5）发展出新的法医学鉴定方法。基因诊断和基因治疗在本书中均有专门章节论述，这里仅介绍基因操作技术在疾病分子机制和发展治疗用生物活性蛋白中的应用。 一、疾病相关基因分析 人类携带的各种有害基因可以导致疾病的发生，本书第六章中已经详细论述了基因与疾病的关系。要确认某一疾病的相关基因，必须进行基因定位(gene mapping)和结构分析。基因定位就是利用不同的方法将各种基因确定到染色体的实际位置上，并分析基因的结构和疾病状态下基因的突变。 Wilson于1911年将红绿色盲基因首次定位到X染色体上，开创了人类基因定位的先河。1968年前利用系谱连锁分析定位的致病基因都局限于X染色体上。Donahue于1968年利用系谱分析将Duffy血型基因定位于1号染色体上，这也是人类首次将基因定位于常染色体上。但是这些定位都相当初步，尚不能分析基因的结构。 20世纪80年代以前可以进行结构分析的疾病相关基因仅限于个别功能异常非常明确，基因表达产物的纯化较为容易的遗传性疾病，尤其是血液系统疾病如镰刀状贫血、地中海贫血等，其它致病基因研究一直难以取得突破。20世纪80年代80年代中期以后，随着分子生物学技术的发展和重组DNA技术水平的提高，尤其是PCR技术的广泛应用，使得疾病相关基因的鉴定与克隆工作得以迅速发展。疾病相关基因的确认强烈依赖于家系分析，有关家系的收集和统计分析方式请参阅遗传学书籍，这里仅介绍克隆致病相关基因的两种策略： 功能性克隆 功能克隆(functional cloning)是指从对一种致病基因的功能的理解出发克隆该致病基因。这种方法主要用于某些生物化学机理已经明确，基因表达产物较易得到部分纯化的遗传性疾病，实际上是利用纯化蛋白克隆致病基因。获得部分纯化的蛋白质后可以采用两种方式进行基因的克隆，一是根据已知的部分氨基酸序列合成寡核苷酸作为探针，筛选cDNA文库；二是利用特异性抗体筛选表达型cDNA文库。 cDNA文库和基因组文库技术的建立使得人类基因分析工作的效率大大提高。人们不再需要纯化大量的蛋白来分析其序列，只要小量的纯化蛋白进行部分氨基酸序列分析就可以进行基因的克隆。目前既使是部分纯化的蛋白亦可以经电泳分离，直接将所需的蛋白从电泳胶中切下来进行序列分析。得到部分氨基酸序列信息后，可以与蛋白数据库相比较确定它是一个已知分子还是一个未知分子。如果是一个未知分子，可以按照其氨基酸序列推导出mRNA序列，然后合成寡核苷酸链作为探针，在cDNA文库中筛选获得其cDNA序列，从基因组文库中获得其基因组序列。如果纯化蛋白过于困难，又有抗体可以利用的话，则可以从cDNA表达文库中筛选得到相应的克隆 （图7-11）。上述两种方式获得的阳性克隆，经序列测定及功能分析确定其是否为致病基因。导致血友病的第Ⅷ因子基因的克隆采用的就是这一策略。 图7-11 从蛋白质纯化到基因克隆 现在，人们把通过比较正常与异常情况下mRNA表达差异来克隆疾病相关基因的策略也归类于功能克隆。这些方法包括：（1）削减杂交(subtractive hybridization)，即将正常与异常同一组织的mRNA或cDNA文库进行液相杂交，从中筛选出表达有差异的克隆作为候选致病相关基因；（2）差异显示（differential display）PCR能很灵敏地扩增两个mRNA样品中有差异的片段，克隆后进行分析；（3）基于PCR的削减杂交法将前两种方法结合起来，克服了削减杂交灵敏度低，差异显示PCR假阳性高的缺点。 功能克隆的主要缺点是由于大多数症状的生理、生化变化很复杂，对与之有关的蛋白质了解甚少，对其基因表达主要组织也知之不多。而且不同组织以至于同一组织的蛋白质与mRNA的“正常”差异很难与特异性差异区别。这就是为什么在“定位克隆”问世之前，仅有