耐热碱性磷酸酯酶的三维结构分析及其结核杆菌耐药机理的初步的研究.pdf

- ；嚣警‘鬣P - - 第一部分： ， 。It瞰雕科F__F●，oklr：●I■l o t彩黔， 摘 要 ／近年来，文献中用AP代替同位素作探针标记的报道越来越多，但由于所用的 、P来自嗜温生物，不能适用于较高温度下的操作实验， 因此应用受到一定的 限制。我所的毛裕民课题组筛选到一株产耐热碱性磷酸酯酶(FD—TAP)的菌株， 所产的FD—TAP在95℃保温60min仍能保留原来活力的75％，在此基础上成 功地进行了FD．TAP基因克隆，并通过基因突变制备了一系列衍生物，做了大 量的生物活性和热稳定性方面的实验，由于目前尚未得到FD—TAP的单晶，j我 们试图用同源结构模拟的方法，预测FD—TAP的三丝丝煎，解释科学研究中观 察到的实验现象，并为进一步研究FD—TAP的结构和功能间的关系奠定基础。 以大肠杆菌碱性磷酸酯酶(BAP)为主要结构模板，用计算机同源结构模拟方法 构建了耐热碱性磷酸酯酶(FD．TAP)的三维结构，对它们的结构特征进行了分析 基础上，又构建了FD．TAP三个突变体的结构，用CHARMM能量计算法研究 了FD．TAP及英三个突变体码能薹写吾摹蛋白热稳定性之间的关系，得到了与实 验完全一致的结果，这说明，如果氨基酸残基置换使蛋白质j堂于的总能量降低， 疏水·}生增高和柔韧性减小，往往使蛋白质的耐热性增加。 Abstract the AP aremoreandmore abOUC with rather Recently,there reFIotis labelingprobe use js】imitedsincejtscomefrom than the ofAP bacteria， jsotope．bul mesopbilic ourjnstitutehave in of thuscannotbeutilized high．temperatureoperation．Onegroup an strain thermo—stableAP canretain got thermophilicproducing rFD—TAp)，which in for cultured number its after 95。C60min．Meanwhile，a 75％enzymaticactivity As areobtainedtestits and activities。the ofderivatives to thermostabilitybi0109ieal