红细胞血型血清学技术的发展和应用.ppt

二十一世纪临床输血工作 输血安全和输血相容性实验 红细胞血型相容性实验规范化 输血传播病原微生物检测 输血相容性实验 血型定型：抗原、基因水平 抗体检测：筛检、鉴定、确证 交叉配血：完全和不完全抗体 血型血清学免疫基础概述 抗 原： （1）免疫原性 （2）反应原性/抗原性 根据抗原来源与机体的亲缘关系分类： ①异种抗原 ②同种异型抗原：ABO、Rh、HLA等 ③自身抗原 ④异嗜性抗原 血型血清学免疫基础概述 抗体: 抗体都是免疫球蛋白 并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性 Ab是功能描述，Ig是化学结构描述 分泌型Ig(sIg)和膜型Ig(mIg) Ig不耐热，在60-70℃被破坏 Ig能被多种蛋白酶水解 血型血清学免疫基础概述 类：根据CH抗原特异性的差异，将Ig分为IgG、IgM、IgA、IgD、IgE 五类 亚类：根据CH(主要是铰链区)AA和二硫键的差异 IgG: IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 IgA: IgA1、IgA2 IgM: IgM1和IgM2 型：根据CL化学结构与抗原性的差异 ?和?型 亚型：?1、?2、?3、?4 血型血清学免疫基础概述 补 体： 主要由肝细胞、巨噬细胞等合成，半衰期约1天 多为糖蛋白，占血清蛋白总量的10%左右 血清中各成分含量不等，C3含量最高 正常生理情况下，以非活化形式存在于血清中 性质不稳定，加热56℃ 30min失活 对温度、酸、碱、蛋白酶、乙醇等敏感 血型血清学免疫基础概述 补体系统的三条激活途径 经典途径（classical pathway） 旁路途径（alternative pathway） MBL途径（MBL pathway） ( MBL：甘露糖结合凝集素) 补体系统的激活是在某些激活物质的作用下，各补体成分按一定顺序，以连锁的酶促反应方式依次活化，并表现出各种生物学活性的过程，故亦称为补体级联反应 血型血清学免疫基础概述 抗原抗体反应 是抗原和相应抗体之间的特异性结合反应 既可发生在体内，也可发生在体外 一般规律： ①特异性 ②可逆性 ③阶段性 ④比例性 血型血清学免疫基础概述 特异性：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定 可逆性（reversibility)：指Ag与相应Ab结合成IC后，在一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性 IC解离取决于： ①抗体对相应抗原的亲和力 ②环境因素 血型血清学免疫基础概述 环境因素：pH值、离子强度、温度等 常用于解离IC的物质有：3M硫氰化钾、pH2.4 0.1M甘氨酸、7M尿素等 解离后抗原、抗体仍保持原有特性 血型血清学免疫基础概述 阶段性 第一阶段：特异性结合阶段 ①反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成 ②不出现肉眼可见反应 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等反应 ①反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长 ②受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响 血型血清学免疫基础概述 比例性（proportionality） ： 最适比或等价点：指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时，才出现可见反应 等价带：抗原与抗体分子比例合适的范围 带现象：Ag与Ab比例不适而不出现可见反应 前带(prozone) ：抗体过量时 后带(postzone) ：抗原过量时 血型血清学免疫基础概述 抗原抗体结合力： 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 不形成牢固的共价键，通过非共价键结合 涉及几种分子间的作用力： ①静电引力 ②范德华力 ③氢键结合力 ④疏水作用力 血型血清学免疫基础概述 影响抗原抗体反应的因素： 一、反应物自身因素： 抗原：理化特性、Ag决定簇数量、Ag决定簇种类 抗体：来源、特异性与亲和力、浓度 二、环境条件： 电解质：0.85%NaCl 酸碱度：pH 6～9 温度：15 ℃ ～ 40℃ 血型血清学免疫基础概述 检测抗原抗体反应的基本技术： 凝集反应（又称直接凝集反应） 颗粒性Ag + 相应Ab→→→→颗粒性团块样凝集 沉淀反应 可溶性Ag + 相应Ab→→→→免疫复合物出现沉淀 溶血反应 RBC血型Ag ＋ 相应血型Ab→→→→溶血（红细胞破坏） 红细胞血型血清学概要 (一)血型定义 血型是血液系统的一种遗传多态性，是产生抗原抗体的遗传性状。 (二)血型抗原 红细胞上的化学构型，必须