细胞凋亡检测试验方法.ppt

2007年《美国科学院院报》（PNAS）的一篇文章中，通过数学方法，对科学杂志的引用关系进行了分析，对当前的88个研究领域进行了排序。 分子与细胞生物学当之无愧成为最大热门。 * * 对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈 细胞生命活动 突变体分析 突变体分析 蛋白修饰分析 基因表达 多肽定性分析 生物信息学 序列测定 双向电泳分析 DNA分离与克隆 机器人技术 (robotics) 功能基因组学 蛋白质分离与制备 蛋白质组学 * * 重点研究领域： 　染色体DNA与蛋白质相互作用关系 　　　—主要是非组蛋白对基因组的作用 　细胞增殖、分化、凋亡的相互关系及其调控 　　 　　细胞增殖、分化、凋亡与衰老是细胞最重要的生命活动现象，它们既相互联系又相互制约并受到一系列基因的调控。一切动植物的生长发育都是依靠细胞增殖、分化与凋亡来实现的。 　细胞信号转导的研究 包括细胞间信号传递、受体与信号跨膜传导、细胞内信号传递途径 　细胞结构体系的组装 生物大分子如何逐级装配并最终形成生物赖以进行生命活动的细胞结构体系的问题 * 美国科学情报研究所（ISI）1997年以来SCI（Science Citation Index）收录及引用论文检索，全世界自然科学研究中论文发表最集中的几个领域分别是： ?细胞信号转导（signal transduction）； ?细胞凋亡（cell apoptosis）； ?基因组与后基因组学研究（genome and post-genomic analysis）。 * Apoptosis is a multi-step, multi-pathway cell-death programme that is inherent in every cell of the body. Apoptosis can be initiated either through the death-receptor or the mitochondrial pathway. Caspases that cleave cellular substrates leading to characteristic biochemical and morphological changes are activated in both pathways. The apoptotic process is tightly controlled by various proteins. Immune cells (T cells natural killer cells) can kill tumour cells using the granule exocytosis pathway or the death-receptor pathway. Cancer treatment by chemotherapy and -irradiation kills target cells primarily by inducing apoptosis. Therefore, modulation of the key elements of apoptosis signalling directly influences therapy-induced tumour-cell death. Summary * * * 1.形态学方法 2）荧光显微镜观察： 　　荧光染料吖啶橙(AO) 、碘化丙啶(PI) 、溴化乙锭(EB) 等染色,在荧光显微镜下可观察到凋亡细胞的细胞核改变和凋亡小体的形成。 　　这种方法适用于对体外培养细胞悬液的检测,组织脱蜡切片经RNA 酶作用后也可用此法染色观察。 　　荧光显微镜检查法方便易行,现已成为细胞凋亡检查的常用手段。 * 　　On this slide the easiest and historically first way of identifying apoptotic cells is shown. In this assay the blue fluorescent dye DAPI(4,6-Diamidine-2-phenylindole dihydrochloride) has been used, which specifically stains DNA. * ?1.形态学方法 3）透射电子显微镜观察： 　凋亡细胞在电子显微镜下可见细胞体积变小,细胞质浓缩,内质网、线粒体增多,细胞膜微绒毛消失、起泡、出芽、形成凋亡小体。超微结构观察是诊断细胞凋亡最可靠的方法。 　但该法只能定性,不能定量,而且观察到凋亡小体的