细胞外基质裂解酶Heparanase1和糖尿病视网膜病变新生血管形成的关系及其作用机制的研究.pdfVIP

细胞外基质裂解酶Heparanase-1与糖尿病视网膜病变新生血管形成的关系及作用机制研究 变新生血管形成的关系及作用机制研究 专 业：眼科学 博士研究生：马萍萍 导 师：唐仕波教授 中文摘要 眼新生血管性疾病如角膜新生血管、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑变 性等，是以糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy，DR)为首的一组严重危害 患者视功能的常见致盲性眼病。新生血管的形成机制尚不十分清楚，目前亦无理 想的治疗方法。在众多的促血管生长因子中，血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)在细胞增殖、迁移和黏附等信号转导的起始反 应中起关键性作用，但是直接抑制VEGF及其受体并不能完全阻止病理性新生 血管的发生，因而新生血管的形成是一个多因素、多途径参与的复杂病理过程， 找到各种促血管生长因子的上游调控枢纽是阻止新生血管形成的关键。众所周 知，细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)在细胞接触、生长和分化过程中起 重要作用，是各种细胞因子的“储存库”，其主要成分之一硫酸乙酰肝素蛋白聚 sulfate 糖(heparan 线性硫酸乙酰肝素(heparansulfate，HS)侧链组成，其HS侧链可以结合、储存各 层，而在毛细血管中主要位于内皮下的基底膜，促进内皮细胞的增生、迁移，以 醛酸酯酶，是细胞外基质重要的裂解酶，HSPG是其特异性底物，Hpa识别HS 细胞外基质裂解酶Heparanase-1与糖尿病视网膜病变新生血管形成的关系及作用机制研究 侧链的特异位点，将HS降解为10—20个糖单位大小的短糖链，释放HS结合的 细胞生长因子，在许多生理、病理过程如形态发生、组织修复、炎症、肿瘤新生 血管形成和转移过程中起重要作用。因而，Hpa-1可能是控制各种活性细胞因子 释放的上游枢纽。为我们研究病理性新生血管形成的机理提供了思路。 和细胞定位不同，可能有着不同的生物学功能。与新生血管关系密切的是Hpa．1， 定位于染色体4q21．3。目前Hpa抑制剂的设计主要根据HS或其类似物。研究较 sulfate，PI．88)，PI．88在结 多的是硫酸化磷酸甘露戊糖(phosphomannopentaose 构上与HS相似，与HS竞争性结合生长因子如：FGF一2和VEGF，阻止生长信 号传递到细胞，抑制新生血管形成。PI．88的研究已进行到多中,L,III期临床评价。 本课题拟观察糖尿病视网膜病变患者Hpa．1的表达及抑制剂PI．88在糖尿病 视网膜病变中的作用，探讨Hpa一1与视网膜新生血管形成的关系及其作用机理。 目前国内外尚未见Hpa．1与视网膜新生血管关系的研究报道。 第一部分糖尿病视网膜病变患者外周血中 Heparanase一1的表达 目的：观察糖尿病视网膜病变患者外周血Hpa．1的表达，探讨Hpa．1表达与糖 尿病视网膜病变的关系。 方法：50例糖尿病视网膜病变患者和15例健康人分为三组，Groupl：正常对 照组(normal diabetic (non-proliferative diabetic 视网膜病变组(proliferative 对象枸橼酸抗凝的外周血6ml，密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞 bloodmononuclear (peripheral 和Western Blot方法检测PBMC中Hpa．1的表达。 细胞外基质裂解酶Heparanase-1与糖尿病视网膜病变新生血管形成的关系及作用机制研究 经半定量分析，NPDR组、PDR组患者Hpa-1高表达，分别是正常对照组表达 染色的细胞胞浆为棕色着染，通过400倍光镜下阳性细胞计数，三组的阳性细胞 组间差异无统计学意义(P≥0．05)；Western Blot分析，三