小麦籽粒脂肪氧化酶活性功能标记的开发和应用.pdf

摘 要 脂肪氧化酶（LOX）是影响小麦籽粒和面粉储藏特性的主要因素之一，通过 降低小麦籽粒中的LOX 活性可以有效地延长其储藏时间。目前主要采用生化检 测的方法来测定小麦籽粒中的LOX活性，但此方法成本较高，完成一次检测的 时间较长且选择效率低，不能检测育种早代材料中的LOX活性，因此本文试图 通过研究小麦LOX基因遗传变异的规律，开发出小麦籽粒LOX活性的分子标记， 来改良LOX活性。本试验对已公布的LOX基因序列进行了搜索和比对并设计引 物，研究小麦籽粒LOX 活性的功能标记，并用该标记分析了203 份小麦品种（系） 基因型与表型之间的关系。主要结果如下： 1、根据 NCBI 网站上已公布的小麦LOX基因（GenBank GU167920.1）序列，在 不同位置设计了多对引物，以LOX活性差异较大的两组材料基因组DNA为 模板进行PCR 扩增，结果发现其中一对引物（LOX1-wp01）在高、低LOX 活性材料中表现出多态性。引物LOX1-wp01 扩增产物的电泳带型在两组材料 间存在明显差异，其在高LOX活性的材料中均扩增出a、b、c三条带，在低 LOX活性的材料中均扩增出a、c两条带。利用该标记检测203份小麦品种， 结果表明有164个品种可以扩增出a、b、c三条带，占总样本量的80.79%， 其LOX 活性平均值为10.46nkat/g；39 个品种扩增出a、c两条带，占总样本 量的19.21%，LOX 活性平均值为7.36nkat/g，方差分析表明两者的差异达极 显著水平（P0.01）。因此，认为LOX1-wp01 可以在小麦LOX活性分子标记 辅助选择中加以应用。 2、利用LOX1-wp01 对203 份小麦品种（系）的基因型进行检测，分别筛选到鹤 麦026、内白、W1032、郑麦9405、鲁麦22、安农糯1、ZWY-10、周麦16、 -1 皖协497、烟农21等10份高LOX活性品种（系），LOX活性在14.65nkat·g ～ -1 19.43nkat·g 之间；周麦11、蒿优9409 、淮麦19 、内乡188 、P206 、陕 228 、扬辐麦5242 、皖0606 、安农95081-8 、皖0202 等10份低LOX活 -1 -1 性品种（系），LOX活性在4.56nkat·g ～5.93nkat·g 之间。这些资源材料对 于针对小麦LOX活性的品质改良研究具有一定的实际意义。 3、切取电泳条带a、b、c 回收、测序，经Blast 分析发现，a、b、c三条序列都 与小麦 LOX1 基因存在高度同源性，a 序列与硬粒小麦 Lpx-B1.2 （HM126467.1）基因序列重合区域为99%，相似率达100%；b 序列与硬粒 小麦Lpx-B1.1（HM126468.1）基因序列重合区域为100%，相似率达99%； c序列与硬粒小麦Lpx-B1.1（HM126468.1）基因序列重合区域为99%，相似 率达96%。同时，a、b、c三条序列自身也存在高度同源。进一步分析发现， 在所扩增的基因序列片段中存在3 个内含子，所有内含子都符合内含子的 I GT-AG 3 3 法则，且 条序列的差异区段都分布在这 个内含子之间。因此，本 研究认为在普通六倍体小麦中 LOX1存在 3 个位点，分别指定序列 a 为 LOX1.2(GenBank JQ715610)，序列b 为LOX1.1(GenBank JQ715609)，序列c 为LOX1.3(GenBank JQ715611)。 4、通过对NCBI上注册的禾本科作物LOX基因序列的搜索与比对后发现，禾本 科作物的LOX基因大体聚为四类，第一类包括L37359.1、HQ913602.1 和 DQ474244.1 LOX3 NM001112503.1