烟酰胺高产菌种筛选及烟酰胺检测生产工艺优化(正稿).docVIP

高酶活烟酰胺生产菌株的筛选及腈水合酶催化反应条件优化 摘要 烟酰胺作为B族维生素的重要成员，参与了机体内两种重要辅酶的形成。烟酰胺作为重要的营养性添加剂被广泛应用于应用于饲料生产行业，其在医药、食品、化妆品行业的应用前景也非常广阔。在工业生产方面，人们主要利用化学法和微生物法进行烟酰胺生产。烟酰胺的微生物生产法有着化学法无法比拟的优越性，此方法对环境几乎不造成污染，且生产成本低，工艺简便。 在本实验中，主要以下四个方面进行了实验研究并取得了一定的成果： (1) 以实验室现有菌种HD1220为出发菌株，分别使用ARTP诱变、微波诱变、EMS诱变三种单因子诱变以及在各因子最佳诱变条件下的复合诱变，确定了复合诱变的最佳条件为：ARTP诱变时间240 s；微波诱变强度60 %，微波照射时间90 s，；EMS浓度0.8 %。诱变完成后，筛选出一株能够稳定遗传且酶活高达1764U的高腈水合酶活性菌株，与出发菌株相比，诱变后菌株酶活提高了33.13 %，并将该菌株暂时命名为NHD-1。 (2)利用HPLC对烟酰胺进行检测，通过对HPLC检测的紫外检测波长、流动相流量、流动相比例三个条件进行的单因素优化实验，最终确定HPLC检测烟酰胺的各个最优条件为：紫外检测波长为220 nm，流动相的流量为0.4 mL/min，流动相中甲醇：水=1：3。在以上条件下，烟酰胺出峰时间为5.306 min，与条件