青钱柳多糖分离纯化结构解析与生物活性及研究.pdf

摘要 摘要 青钱柳【Cyclocarya (Juglaruiaceae)青钱柳属植物。它是我国特有的单种属植物，广泛分布于安徽、 nl 福建、湖北、湖南、江苏、江西、四川、贵州、浙江等地的海拔420～2500 的山区，是国家重点保护的濒危植物之一。其树皮、树叶可用于治疗糖尿病、 高血压、高血脂。目前，青钱柳茶已得到美国食品与药品管理局(FDA)的认 可，是我国第一个获得美国FDA颁发质量证书的保健茶。本文以江西修水的青 钱柳为实验材料，综合应用食品科学、有机化学、天然产物化学、分析化学、 生物技术及现代仪器分析等一系列现代研究方法和技术手段，较为系统地研究 了从青钱柳中提取纯化出来的青钱柳多糖。对该多糖的含量测定、提取纯化、 分子量、单糖组成、结构特点及部分生物活性进行了较深入的研究。本文对青 钱柳多糖的提取、测定及生物学活性作用进行了较深入的研究，为青钱柳多糖 作为功能性食品基料和用于新药开发的研究奠定了基础。主要研究内容与结论 概括如下： 1．将蒽酮一硫酸法用于测定青钱柳多糖的含量。青钱柳用水提取，经多级处 理除去脂类、单糖、双糖、低聚糖、氨基酸、蛋白质等杂质制得青钱柳精制多 糖，精制多糖溶解后与蒽酮．硫酸试剂显色，通过扫描确定最大吸收波长，然后 用精制多糖测得青钱柳多糖对葡萄糖的换算因子。结果表明，该测定方法简便 可行，供试液在8h内显色稳定，重现性较好，平均回收率为100．8％ (RSD=I．90％，n=3)。所测江西修水青钱柳中多糖含量为4．387％。 2．将两种植物活性成分提取技术应用于青钱柳多糖的提取研究。以江西修 水青钱柳粉末为原料，采用热水浸提法提取青钱柳多糖。研究了提取温度、提 取次数、提取时间和料液比对青钱柳多糖得率的影响，并以提取次数、提取时 间和料液比为考察因素，在90℃下，采用L9(33)正交实验确定了热水浸提法提 min，液料 取青钱柳多糖的最佳工艺参数，即提取次数为3次，提取时间为150 比为l：8。在上述提取条件下，热水浸提法提取青钱柳多糖得率可达到6．54％。 在单因素实验的基础上，利用Box．Benhnken中心组合实验和响应面分析法，确 定了超声辅助提取青钱柳多糖工艺的最佳条件，即固液比为1：8，温度为58℃， ll 摘要 时间为59min，在此条件下青钱柳多糖理论提取值达到4．96％。 3．探讨了青钱柳多糖的脱色工艺。青钱柳粗多糖色泽很深，呈黑褐色，影 响其分离纯化、化学结构、作用机理及构效关系的研究。本文研究了活性炭吸 附法用于青钱柳粗多糖液脱色的的效果，探索活性炭吸附法用于青钱柳多糖脱 色的可行性。分别以粗多糖液脱色率为指标，采用J下交试验法对脱色的最佳工 艺进行优选并考察活性炭吸附法对青钱柳粗多糖的影响。结果表明，活性炭吸 附法对青钱柳粗多糖液具有良好的脱色效果，脱色的最佳工艺条件为：温度为 20 40℃，吸附时『白J min，活性炭用量1．0％，pH值3．5。结论：活性炭吸附法用 于青钱柳多糖的脱色效果良好，且简便易行。 4．研究了青钱柳多糖的纯化工艺及理化性质。本文首次运用Sephacryl-400 Purifier100联用对青钱柳精制多糖 葡聚糖凝胶层析柱与大分子纯化系统fiLKTA 进行纯化，得到一个主要多糖组分，该组分在示差检测器上监视的多糖吸收峰 和紫外检测到的蛋白质特征吸收峰的最大值位置基本重叠，表明该组分可能是 糖和蛋白的复合物，收集该组分，命名为CPC．1。将纯化所得青钱柳多糖CPC一1， T-500标准葡聚糖和蓝色葡聚糖为标准作出标准曲线，采用HPGPC法测定了 105859道尔顿。通过氨基酸自动分析仪法测定 CPC．1的分子量，大小分别为l CPC．1中氨基酸种类及含量表明CPC．1中含有17种氨基酸成分，其中天冬氨 酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸和精