苹果浓缩汁中耐热菌PCR法定量检测技术及研究.pdf

y650185 苹果浓缩汁巾耐热蔼PCR法定量检测技术研究 鸯秀平 璃葵：鼗主嚣勰势孢稃螫(AlicyclobaciItus 魏其辩热辩酸豹黪栏霹燎爨果汁爨氏蓉饕避程囊毒渍，在会遣熬祭停下，霹逐速 生长繁殖丽导致果汁艨肖品质的劣变。谯浓缩苹果汁出口时，阑外厂商要求猩 10mL浓缎汁中该蘸含爨不太子一个。爨嚣，嚣内钋对越萤静检测方法都采用传 统鞠缨毽绩葵平驻记数法，培养周赣长(4砖炎)，搡终繁琐，成为莱汴厂质量控 露l獠净孛瓣灌垂繇节。螫释捷滚壤暴汴孛辩煞越羧蓥夔羧溅筝致逶运潜嚣手生产 鹣矛黯，簸努须研究其抉速检瓣技术。 聚台酶链式反应(pCIR)技术是一种快速、灵敏的微生物舶检测方法，可程 数夺辩内，将靶澎列将辩靛扩增麓百万嵇戳上，达鬟检溯莓躯。激雨PCR技术稔 测苹果浓缩汁中的耐热穗已存一定进展，假缳预增蓠15h，整个检测时闻仍较长， 鼠强怒是牲，不蕤定爨。 本实验在嚣入王僚鹣蕊础上，采用备种方法，提高PCR梭测静灵敏度，希蹙 苓缀壤蘩，壹接扩增辩黪穰至《霹捡溅永乎，避一步宠善是毪系缝，蓠次袋瘸竞争 定擞PCR，建立果汁中耐热菌的定量检测方法。即，构建竞争模板，使融知量的 竞争横投与未知爨的靶侉勇l在同一反应体裂中扩蠖，这到对凝序列弱定爨。逶避 研究，褥捌了以下缝论； l。疆究了蠢滚裘辩法、徽滚法、越声法、酶焘溱襄鳞法、缀典酶洼、SDS浚、 CTAB法、’改进CTAB法、氯化苄法、爨【仿瀛接摄取法等多种模檄翩备法，结果 表明，氯化苄法能够获得较好质岛量的PCR反戚模板。其步骤殿优化参数如下； LSDS和150la 纂蓠，沉淀燕入250laL的TE，50la L氯化苄，滟匀，50℃温浴 lh。加入150p 淀。 H 2．改进的25 使蠲10％营渣槔绳遴裁。 3。慕臻热痿凌与降落PCR髂系，可大壤凄摄褰捡溅灵敏壤。热疟旗PCR， 冬溱漆上潺匀冬戏努，港PCR饺瀑麦舞+奎弼℃疆主对魏撵扩避{黪藩PCR，邋 101， 又涵疫簸60C簿游爨50C。采爱上述谯纭俸系爱，捡溺瑟敏凌赉l妒摄嵩至l 能够检测到5×101个目标模板T，但扩增祭带非常微弱，以5x102个目标模板T 扩罐砖，缀莱较兔稳定。 4．首次设计了引物3，与引物1配对，通过～轮PCR得到党争模板C，通过 瀑发爨度PCR获褥梵反斑靛最佳退灭瀑发隽5s℃。班弓l镌1、雩|物2扩矮C、T， 对凝胶电泳结果分析，c麒有和_r一样的与引物1、引物2结合的位点，C、T相 蓑约50bp，验证了c兔鼹嚣竞争模扳； 增效率较为一致。C与T在同一反应体系中共扩增的检测低限为5×102个靶分子， 扔步建立了耐热麓PCR定爨方法。 6．运用本试验研究掰建立的竞争定鬣PCR梭测到培养样赫与人工阐添果汁 汁串|li|熟蕊豹硷溯，有镣避一疹轿究改逡。 关键词；耐热菌聚合酶链式反应快速检测定性定量 Studieson PCR for Detectionof Quantitative Rapid acidoterrestrisin JuiceConcentrate Alicyclobacillus Apple Feng Zai-Ping Abstract： common acidoterrestris．themore nameiS Alicyclobacillus