糖化终末产物受体参糖尿病视网膜病变机制与干预及研究.pdfVIP

糖化终末产物受体参与糖尿病视网膜病变 机制及其干预研究 中文摘要 持续的高血糖是引起糖尿病并发症的个重要因素，在高l札糖环境巾，还原 性糖如葡萄糖与循环蛋白或结构蛋白通过共价交联，发生非酶糖化作用形成糖化 终未产物(Advancedend glycationproducts，AGEs)。这些共价化合物与组织血液 中多种细胞知叟份密切柏父，其在各种组织蛋白上的过度沉积可引起老龄化和糖尿 病的多种并发症。 foradvanced end 糖化终末产物受体(Receptor glycalionproducts，RAGE)是 近年来被明确称为细胞表面分子免疫球蚩广1超家族新成员的AGEs的特异件受 体，可在多种细胞表面表达。但是天于视网膜微血管内皮细胞和周细胞RAGE 的表达尚在研究阶段，深入研究RAGE的特性和寻找有效阻断该受体的方法， 肯助于系统地探索糖化终末产物参与糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy， DR)的病理机制。 奉实验帑在前期工作中通过免疫组化观察到糖尿病大鼠视网膜血管上AGEs 的沉积，而且体外孵育的AGE—BSA和AGE．RSA能够诱导iF常大鼠发生类糖尿 稍抛网膜血管病变的发生。本研究直用选择性培养基进行牛视网膜微血管内皮鳃 胞和剧细胞的原代培养，观察微血管细胞上RAGE的表达以及针对RAGE序列 的反义寡核苷酸的干预作用：并同时观察了随糖尿病病程的延K，体内 RAGEmRNA表达的变化以及氨基胍是否具有干预作用。 第一部分糖化终末产物受体参与糖尿病视网膜病变机制的研究 首先心用PCR方法，分别观察2wk，4wk和8wk糖尿病大鼠以及氨基胍十 预8wk后视嘲膜RAGEmRNA的表达。本实验发现随着糖尿病病程的延长，4wk 组糖尿病大鼠视网膜上RAGEmRNA的表达(relativeIOD=0，3350士0，0696)较 2wk组(relmive 制的， 8wk组视蚓膜上RAGEmRNA的表达(relative 见增加，与4wk组比较尤统计学意义(PO．05)。无论微血管组织或细胞表面的 受体，都l可能达到一定的饱和，所以在8wk病程糖尿病大鼠组，RAGEmRNA的 表达’j 4wk组比较末见明显的升高。正常对照组在整个实验过程中，其 RAGEmRNA均术见明显改变，但可见弱表达，说明丁F常组织巾也存存 巾加灶AGE—RAGE的斗H’7．作用，促进DR ff,j技J陡。本研究观察了8wk病程组撕 较求。r以氨基胍治疗组明显r’降(relative 常刈照组(relative IOD= 0．1055±0．021 8)比较无明显差异(P0．05)，推测氦基胍可能直接或间接调节细 胞AGEs受体基冈的表达，从而减少AGE—RAGE相互作用可能导致的组织病理 改变，提示氨基胍和其他AGEs抑制剂在防治糖尿病慢性并发症中的重要意义。 其次本实验应用牛视网膜微血管进行消化分离．采用含10％人IfIL清、 Modified Eagle’S RetinalEndothelial Retinal 皮细胞(Bovine Cells，BREC)和周细胞(Bovine 况和应用VonWillebrand因子抗体免疫组织化学鉴定内皮细胞：以及0t一平滑肌肌 动蛋白抗体免疫组织化学鉴定周细胞。选择性培养基的应用使得内皮细胞和周细 胞的纯度达到98％以上，并能连续传代。BREC早期似小鲤鱼状聚集在微血管碎 片周同，里片状鹅卵石样单层生长，存在接触性挪制：周细胞多散布在距血管6卒 片稍远处，形状不规则，旱无接触忡抑制的7L长。BREC可吞噬Dil—Ac—LDL， 细胞浆内育荧光表达；消化传代后BREC中VonWillebrand因子表达阳性，而Ⅱ一 冈子表达阴性。本实验