药物蛋白糖基化修饰+.pptVIP

目录 蛋白类药物的市场前景 糖基化的作用 糖蛋白药物的表达系统 药物蛋白糖基化的展望 蛋白类药物的市场前景 1982年美国Likky公司首先将重组胰岛素投放市场，标志着第一个重组蛋白质药物的诞生。 几十年来，蛋白质药物产业蓬勃发展。全球生物技术公司总数已近5000家，上市公司有600余家，销售总额近400亿美元，其中蛋白质药物占总销售额的70%。 从整个产业的分布情况看，主要集中在欧美，占全球总数的85%，欧美公司的销售额占全球生物技术公司销售额的97%。 目前已批准近150个蛋白质药物上市，适应症达220种，使3.25亿患者受益. 更重要的是目前还有近400种蛋白质药物处于临床研究阶段，约3000种处于临床前研究阶段；预计到2025年，美国生物技术市场总额将达到2万亿美元。 2.聚糖对组织靶向的作用 不同的组织对不同的糖基的亲和力也是不同的。因此蛋白质药物带有不同的氮偶联聚糖, 可以特异性的靶向细胞或组织。 例如：在肝细胞中发现的唾液酸糖蛋白受体可以与含有末端半乳糖或氮乙酰半乳糖胺的糖蛋白结合。因此, 肝受体可以用于完成组织特异性蛋白质靶向。 3.聚糖在调节生物活性上的作用 氮偶联糖基化通过调节和特定受体的相互作用可以影响一些糖蛋白药物的疗效。 例如, 免疫球蛋白重链含有一个单一的氮偶联糖基化位点, 从而导致每个抗体结合两个氮聚糖。这个糖基化对于糖蛋白和Fc受体的有效相互作用以及Fc 受体介导的效应子作用( 包括抗体依赖性细胞毒性ADCC和补体依赖性细胞毒性CDC)都是十分重要的。糖基化IgG1大大削弱了ADCC 和CDC，可以通过改变氮聚糖的组成来调节IgG介导的ADCC 。 糖蛋白药物的表达系统 1.酵母表达系统 常用的几种酵母表达宿主 酿酒酵母，乳酸克鲁维亚酵母， 甲醇营养型酵母，巴氏毕赤酵母等 酵母表达系统有以下优点: 1.表达能力高, 2.发酵易于控制, 3.可以进行氮糖基化。 酵母表达系统的不足: 酵母特异性甘露糖限制了酵母在不需氮糖基化的蛋白质(例如胰岛素)生产中的应用。 巴氏毕赤酵母 巴氏毕赤酵母是最近迅速发展起来的一种表达宿主。它以甲醇作为唯一的能源和碳源, 应用巴氏毕赤酵母表达系统表达外源基因具有以下优点: 1.表达载体含有特有的乙醇氧化酶(AOX) 基因启动子, 通过甲醇诱导AOX1 调控外源基因的表达; 2. 可以高密度连续发酵培养, 外源蛋白表达量高; 3. 根据载体类型, 外源基因表达产物既可以在胞内积聚又可以被分泌到培养基中, 而分泌的外源蛋白占酵母细胞分泌蛋白的量大, 利于工业生产和分离纯化; 4. 巴氏毕赤酵母能对所分泌的蛋白进行N、O糖基化修饰且糖基化程度适中。 毕赤酵母对表达的蛋白糖基化 酵母能对表达的蛋白进行N和O-糖基化，其中由于N-糖基化发生较多且其对许多蛋白质的折叠，药物动力学的稳定性及功能是必需的 当蛋白质含有一致性序列Asn-Xaa-Thr/Ser(Xaa代表任何氨基酸)时，毕赤酵母能对其中的天冬氨酸进行N-糖基化。对丝氨酸或苏氨酸进行O-糖基化 人们已经用毕赤酵母表达体系成功表达了500多种蛋白 ，包括疫苗，激素、干扰素、抗菌肽、酶、膜受体蛋白，细菌毒素及其衍生物等。 猪γ干扰素在毕赤酵母中的表达 2.中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系 目前，ＣＨＯ细胞系已被广泛应用于生物学研究和药物蛋白的生产。全球药物蛋白市场至少70％的药物蛋白来源于ＣＨＯ细胞系。 2011年1月中国仓鼠卵巢细胞系基因组测序完成 ＣＨＯ细胞系基因组测序的完成将有助于进一步了解ＣＨＯ细胞功能，获取更多有价值的信息，增加用于药用表达系统中的 ＣＨＯ细胞系的产量，从而 降低成本和加速新的重组 药用蛋白的发现和发展。 CHO细胞系有以下优点: 1.与这一系统有关的专门技术比较成熟; 2.过程可以控制; 3.表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子。 CHO细胞表达系统也有一些不足: 1.成本高; 2.有污染病毒等有害物质 的可能; 3.不能充分控制氮糖基化。 CHO表达载体系统 a.启动子和增强子(P/E);b.内含子(INS);c.多克隆位点(MCS);d.多聚腺苷酸加尾信号(pA);e.选择标记基因, 如共扩增基因二氢叶酸还原酶(DHFR);f. 复制起始区(ori) 和抗性基因(如Ap) 组成的载体骨架 优化表达载体系统的真核调控元件 选择强启动子研究表明:EF1-A启动子是迄今最强的启动子之一 选择高效多聚腺苷酸加尾信号(pA)研究表明:除去