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* * 为研究目的基因是在何时、何种刺激下表达，将荧光素酶基因插入目的基因启动子的下游，并稳定整合于实验动物染色体中，形成转基因动物模型。利用其荧光素酶基因的表达，既与底物作用产生生物发光，代表目的基因的表达情况，从而实现对目的基因的研究。 * 精诺真（Xenogen）是最新无创伤活体动物成像技术，可对癌细胞的生长和转移进行检测，对癌症治疗过程中的癌细胞的变化进行实时观测和评估。 ·?????? 相对于其他无创伤成像技术，如PET、MRI等，精诺真成像技术更便捷，更易于大量样品的检测 ·???????全球唯一家握有生产和检测体内发光动物专利的公司。 * 基因表达检测——Western-blot or 免疫荧光分析 临床研究表明，人多形性腺瘤相关基因的高表达和肿瘤的发生具有明显的相关性 TgPLAG1小鼠可以稳定地自发唾液腺多形性腺瘤，该模型可以为人类唾液腺肿瘤的研究和治疗提供良好的实验材料。 绿色荧光转基因小鼠模型是在小鼠中导入了CMV驱动的EGFP基因， 该模型在小鼠胚胎期和新生小鼠中可以检测到EGFP的广泛表达，可作为细胞移植等科研的工具小鼠模型。 转基因动物的表型分析 五. 转基因动物的生产策略和类型 第一类转基因动物（让转基因在动物体内过度表达） 最常用的是显微注射方法。转基因可用基因本身的启动子，也可拼接组织特异性表达的外源启动子；可转入单基因，也可转入双基因。 第二类转基因动物（让特定基因在体内灭活，丧失其功能，被外源基因置换，即基因敲除技术） 这就是近年来发展的用胚胎干细胞进行基因打靶技术，以产生基因缺陷的转基因动物。 基因打靶（gene targeting）又称基因敲除技术（gene kickout），也是转基因技术的一个组成部分。利用转基因的方法，将外源基因序列导入靶细胞后，通过外源基因序列与靶细胞内染色体上同源基因序列间的重组，将外源基因定点整合到靶细胞基因组上的某一确定位点，而对某一预先确定的靶位点进行打靶敲除的一项技术。 同源重组法制备基因敲除小鼠的基本步骤 典型的基因敲除载体，包括： 同源重组指导序列（3kb~15kb） 筛选抗性基因 替换基因插入位点 根据打靶载体插入基因组方式的不同可分为： 序列插入型载体 序列取代型载体 基因敲除的载体 基因敲除的靶细胞既可以是原核细胞，也可以是真核细胞；既可是植物细胞，也可是动物细胞； 对于单细胞生物和体细胞具有全能性的植物来所，对靶细胞选择要求不高，对任一细胞打靶成功都可获得纯系个体； 但对于动物，普通细胞敲除却无法得到纯系个体，小鼠生殖系嵌合体构建技术的发展却提供了理想的胚胎干细胞靶细胞。 将基因敲除载体导入ES细胞的技术主要是： 电穿孔法 脂质体包埋法 磷酸钙-DNA沉淀法 基因敲除的靶细胞及基因转移方法 正负双向筛选系统（ positive and negative selection，PNS）?该载体含有正负选择基因各一个，正向选择基因多为neo基因，插入载体的同源序列中；负向选择基因常用HSV-tk基因，置于同源序列的外侧。 胸苷激酶蛋白（TK）可使无毒性的丙氧鸟苷（GANC）转变为毒性核苷酸而杀死细胞；而neo基因是G418的抗性基因； 同源重组时，载体的同源区发生重组，同源区以外部分将被切除，所以neo基因保留，HSV-tk基因将被切除而丢失，细胞对G418和GANC都有抗性，因此同源重组的细胞能够在含有G418和丙氧鸟苷的培养基中生长。 而在随机整合时，所有的序列均保留（包括tk基因），随机整合时只对G418有抗性，而对GANC敏感，细胞将被杀死，因此同源重组的细胞不能够在含有G418和丙氧鸟苷的培养基中生长。 PNS采用置换型载体。 基因敲除细胞的筛选方法 Gene targeting method to produce null mutant (“knockout”) or mutant (“knock-in”) mice 目前RNAi、基因插入突变等技术也被越来越多的应用与转基因动物的制备中。 RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象 近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被《Science》杂志评为2001年的十大科学进展之一，并名列2002年十大科学进展之首 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能、基因敲除（弱）动物的制备和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域 siRNA（small interfering RNA）小干扰RNA 推荐数目：《RNA干扰的生物学原理与应用》 宋卫国主编 高等教育出版社 六.