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XR ，患者凝血因子Ⅸ缺乏，Ⅸ因子基因定位在Xq26.3~q27.2。临床表现：易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病率为1/30000。 逆转录病毒载体 +FⅨcDNA 重组体 5` LTR FⅨ neo SV PSO LTR 3` ①导入仓鼠细胞（CHO ）→FⅨ表达； ②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达； ③1991年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。 是我国基因治疗成功的例子。 * 基因疗法 Gene therapy 袁其朋 2009.3 三、研究进展 目 录 一、基本概念 二、主要策略 四、治疗实例 五、问题与展望 基本概念 基因治疗（gene therapy）： 利用分子生物学方法，将人的正常基因或有治疗作用的基因导入靶细胞或组织中，以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用。 对象： 体细胞 生殖细胞 主要策略和途径 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因失活 (gene inactivation) 基因矫正 (gene correction) 四种策略： 两种途径： 体外 (ex vivo)——间接法，回输法 体内(in vivo)——直接法 基因矫正 (gene correction) 将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常序列部分予以保留，使突变的致病基因恢复正常功能。 基因置换 (gene replacement) 将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因得到永久更正。但操作难度大，有伦理学问题。 基因增补 (gene augmentation) 将目的基因导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物能够修饰缺陷细胞的功能，或使原有功能得到加强。 基因失活 (gene inactivation) 利用反义RNA或RNA干扰等技术，特异地封闭某些基因表达的特性，以抑制某些有害基因的表达。 DNA DNA  RNA RNA 反义RNA 阻断表达 载体 目的基因 in vivo ex vivo 靶细胞 基因治疗的两种途径 研究进展----肿瘤 NISHITANI等将表达IL-12的质粒注射到BALB/c鼠肾癌模型体内，发现小鼠肿瘤生长受到明显抑制，而且对再次接种肾癌细胞引起的肿瘤表现出很强的免疫抑制。 Reid等通过肝动脉滴注ONYX-015合并5-FU和亚叶酸钙治疗27例早期胃肠癌合并肝转移病人。病人仅出现轻度或中度的流行性感冒样症状。 研究进展----艾滋病 布鲁斯·莱文等人将免疫细胞从慢性HIV感染者体内取出，再在实验室中将逆转录病毒科慢病毒注入细胞中。阻止了HIV的繁殖，并产生了与已存在的艾滋病病毒抗争的能力。 研究进展----分子遗传病 Powell等用携带FⅧ基因的RV经静脉途径注入血友病A患者，证实了RV治疗血友病的可行性，但长期性及高效表达性尚需进一步探讨。 Manno等通过向重型血友病B患者骨骼肌内注入携带FⅨ基因的AAV2，使患者病情转为轻型，验证了转基因治疗血友病的临床可行性。 研究进展----心血管疾病 单志新等将人VEGF 和Angl的重组质粒DNA联合注射大鼠缺血心肌，证实VEGF和Angl基因联合导入能显著增强缺血心肌的血管生成和侧枝循环的形成，改善心功能。